豇豆ISSR-PCR反应体系的建立-论文.pdf

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1、北方园艺2012(12)：141～143·生物技术·豇豆ISSR-PCR反应体系的建立尹光晶，宋廷宇。，吴春燕，李静，宋述尧(1．松原职业技术学院，吉林松原188005；2．吉林农业大学，吉林长春180118)摘要：以豇豆为试材，用新型植物基因组DNA提取试剂盒提取豇豆DNA，选取ME、dNTPS、TaqDNA聚合酶、引物及模板DNA为主因素进行正交优化试验，从3个不同循环次数中筛选出最佳效果循环次数。结果表明：优化的反应体系为25L的反应体系中ME1．0rnmol／L、dNTP0．2tLmol／I、7hqDNA聚合酶1．5U、引物0．3tLmol／L、模板DNA45ng，循环次数

2、为40次。关键词：豇豆；ISSR标记；反应体系中图分类号：S643．403．6文献标识码：A文章编号：1001-0009(2012)12-0141-03豇豆(VignaunguiculataIWalp)俗称角豆、姜豆、的浓度和纯度。并将DNA稀释到浓度为5ng／／~L，带豆，在我国公元3世纪初张楫所攥的《广雅》l_1中已有备用。相关记载。由于中国豇豆变异性很大，种质资源丰富，1l2．3试验设计采用5因素4水平。(4)正交实验栽培也很广泛。因此，不少学者认为中国是豇豆的次生设计(表1)，对ME_、dNTP、引物、模板DNA和Taq酶起源中心。所以，针对豇豆开展分子标记研究来探讨其用量

3、进行优化。反应体系的总体积为25L，包括1×起源中心以及种质资源鉴定是十分必要的。PCRBuffer，其它各成分按照表1加样，最后用水补足。而ISSR标记方法是近年来以微卫星为引物的PCR1．2．4PCR反应条件及电泳、成像以上16个处理在基础上发展起来的一种成型的分子标记技术。它结合PCR仪9700上进行扩增，反应程序为：94oC5min；94oC了RAPD和SSR标记的优点，具有稳定性较高、重复性1min，55℃1min，72℃2min，40次循环；最后72℃延伸好、多态性高等特点，已在种质资源鉴定]、遗传作图]、10min；4~C保存。用琼脂糖凝胶电泳检测，用凝胶成像基因定位

4、Ⅲ、遗传多样性引、进化嘲、系统发育、分子标系统进行拍照分析。记育种等方面得到广泛应用。该试验选用5因素4水】．2．5循环次数的确定根据以上试验找出最佳组合平的正交实验设计来建立ISSR—PCR反应体系，主要因后，用最佳组合对循环次数进行梯度试验，设循环次数素设置为ME、dNTP、TaqDNA聚合酶、引物、模板分别35、4O、45次。DNA，通过筛选来建立最优的豇豆反应体系，为豇豆的表1ISSR-PCR正交实验设计(L。(4))研究奠定基础。1材料与方法L1试验材料供试材料为豇豆幼叶，采自吉林农业大学园艺学院蔬菜基地。植株生长健壮，叶片正常。1．2试验方法1．2．1基因组DNA的提取

5、采用新型植物基因组DNA提取试剂盒，按照提取说明书提取豇豆DNA。1．2．2DNA浓度检测用紫外分光光度计检测DNA第一作者简介：尹光晶(1987一)。女，吉林松原人，现主要从事果树生理研究工作。E-mail：yinguangng@yahoo．corn．cn。责任作者：宋廷宇(1977一)，男，吉林德惠人，博士，现主要从事蔬菜种质资源创新与利用方面的研究工作。E—mail：tysong422@163．tom。收稿日期：2012一O4一l7141北方园艺2012(12)：143～145·生物技术·培养基种类、BA浓度和蔗糖浓度对春石斛组培苗增殖的影响修景润，朴炫春，姚睿，高日，廉美兰

6、(1．延边朝鲜族自治州农业科学院，吉林龙井133400；2．延边大学农学院，吉林延吉133002)摘要：以春石斛(Dendrobiumcasiflake)的组培苗为试材，研究培养基的种类、BA浓度、蔗糖浓度等因素对不定芽增殖生长的影响，为春石斛种苗的规模化生产提供理论依据。结果表明：在MS培养基中不定芽分化及生长能力明显好于W-bite、Vw、sH、B5及KC培养基，培养30d后每个外植体平均分化出3．7个健壮的苗；在MS培养基中加入BA3．0嘴／L以及蔗糖30g／L时，春石斛不定芽增殖数多，且生长良好。关键词：春石斛；增殖生长；培养基种类；BA浓度；蔗糖浓度中图分类号：S681．

7、903．6文献标识码：A文章编号：1001-0009(2012)12一O143一O3石斛(Dendrobiumcasiflake)为兰科石斛兰属多年养的技术方法进行墨兰根状茎的快速繁殖，克服了种子生草本植物，在我国主要分布于西南和华南地区l】j。春繁殖与分株繁殖技术上的缺点。。]。利用组织培养技术石斛兰属，有优美的花姿、芳香的气味，具有很高的观赏快速繁殖春石斛，能够克服普通繁殖技术上的缺点，缩价值，受到全球消费者喜爱I2]。春石斛主要采用分株及短了人工栽培春石斛周期，