南酸枣ISSR-PCR反应体系的建立及优化-论文.pdf

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1、第43卷第2期南方林业科学Vo1．43．No．22015年4月SouthChinaForestryScienceApr．，2015DOI编码：10．162590．enki．36—1342／s．2015．02．002南酸枣ISSR—PCR反应体系的建立及优化叶金山，李万和，龚斌，杨春霞H(1．江西省林业科学院，江西南昌330013；2．江西省武功山林场，江西吉安343200)摘要：以南酸枣叶片基因组DNA为模板，采用单因子实验方法对影响ISSR反应体系的dNTP、M、引物浓度、模板DNA、Taq酶等5个因子进行优化，结果表明，在20

2、LISSR反应体系中，各反应物的最适含量为：2．5mmol／LMS：+、0．2mmol，LdNTP、0．25～0．5molfL引物、20ngDNA和0．5UTaq聚合酶。利用该优化体系扩增85条ISSR引物。有65条有扩增产物，38条具有多态性，并且利用842引物扩增不同南酸枣DNA模板，扩增的目的条带清晰、多态性好、稳定性强，可以用于后期的南酸枣种质资源鉴定及遗传多样性研究。关键词：南酸枣；ISSR—PCR；单因子实验；优化分类号：$792．99：Q75文献标识码：A文章编号：2095—9818(2015)02—0006—04E

3、stablishmentandoptimizationofISSR-PCRsystemforChoerospondiasaxillart"sYeJinshan。，LiWanhe，GongBin，YangChunxia。(1．JiangxiAcademyofForestry，NanchangJiangxi330013，China；2．WugongshanForestFarm，Ji'anJiangxi343200，China)Abstract：InordertooptimizeISSR-PCRsystemforChoerospondi

4、asaxiUaris，diferentlevelsofconcentrationofdNTP，M，primer,templateDNAandTaqDNApolymeraseweretrailedbysinglefactorexperiment．TheresultsshowedthattheoptimalISSR—PCRsystemforCh．axillariscontained2．5mmo1／LMg2+．0．2mmoI／LdNTP、0．25～0．5mo1／Lprimer、20ngDNA和0．5UTaqpolymerasein20L

5、PCRsystem．Furthermore，65primerscouldproducetargetbandsamong85ISSRprimers，andincluding38polymorphicprimers．WiththisoptimalISSR-PCRamplificationsystem，highresolution，multiplepolymorphicandgoodrepeatabilitybandsweregainedon6diferentDNAtemplates，whichindicatedthestability

6、andavailabilityofthissystem．TheISSR—PCRsystem，whichwasestablishedinthispaper，couldbeusedtostudygermplasmidentificationandgeneticdiversityofCh．axillaris．Keywords：Choerospondiasaxillaris；ISSR-PCR；singlefactorexperiment；optimization南酸枣(Choerospondiasaxillaris(Roxb．)Burtt

7、et否存在多样性目前尚未看到报道。Hil1)为漆树科南酸枣属植物，又名酸枣树、酸醋树、ISSR(InterSimpleSequeneeRepeat)．简单重复五眼果树等，南酸枣为速生多用途优良树种．具有较序列区间DNA标记技术．由Zietkoewiez等[]于1994高食用、材用及药用价值。近年来，发现南酸枣果实年在微卫星(SimpleSequenceRepeatSSR)序列的基中含有丰富的维生素C、氨基酸、果胶、微量元素等营础上创建的．该标记与RAPD标记一样，均为显性标养成分，并开发出一系列深受欢迎的南酸枣糕、果汁记．但结合了

8、SSR和RAPD标记的优点。模板需要量饮料等产品．使得南酸枣在食用方面发展迅速．开发更少、多态性丰富、操作简单、稳定性高且成本较低。前景广阔。南酸枣主要分布在江西、湖南、福建、浙江近年来．ISSR已广泛用于遗传多样性分析[驯、种质资等地。不同产地的