血清诊断酶学

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1、血清诊断酶学刘薇提纲：一发展二方法1•固定时间法2•连续监测法3免疫学方法三常见的血清酶CKLDHALTASTALP参考值0-270U/L80-220U/L5-60U/L5-60U/L30-220U/L组织分布主要分布1骨骼肌2心肌3脑心肌红细胞肺，肝肌肉广泛存在于多种器官中（肝、肾、心、骨骼肌）广泛存在于多种器官屮（心、肝、骨骼肌、肾）广泛分布于各器官（肝、肾、胎盘、小肠、胃）生理变异1年龄2性别3种族年龄很小很小1年龄2孕妇3高脂餐标本要求1可以肝素抗凝2不能溶血1室温保存2最好用血清3不能溶血1不能冰冻2最好用血淸3不能溶血1不能

2、冰冻2最好用血淸3不能溶血1要求空腹2不能溶血1早在1908年，沃尔玛斯就通过测定尿液中的淀粉酶，來诊断急性胰腺炎。230年代时，临床通过测定碱性磷酸酶ALP来诊断肯骼疾病，到60年代ALP一直是世界上测定次数最多的酶。3诊断酶学的真止发展是从50年代建立了连续监测法Z后，可以测定一些用IF1法不可测定的酶,女HALT、AST、CKo470年代时，学者逐步将注意力集中到同工酶测定上。（这是由于人们发现总酶活性浓度的测定，对疾病诊断的特异性远不如人们开始预测的那样高。）5从70年代起，人们开始用免疫学方法直接测定IW的质量，为IW学在临床

3、医学上的发展开拓了一个新的领域。二酶的测定方法:大致经过三个历史发展阶段1.50年代以前大都使用T占I定时间法”，就是让酶和底物作用一段固定时间,（一般半小时左右）然后停止酶反应，用光电比色测产物生成量和底物消耗量，从而计算出酶催化反应的平均速度。例如：用赖氏法测ALT辅助诊断肝炎。2.50年代屮期，国际临床实验室开始采用“连续监测法”，就是习惯上所称的动态法，指连续测定酶反应过程中，监测某一反应产物或者底物的浓度随时间变化的多点数据，求出酶反应的速度，从而间接计算出酶反映的活性浓度的方法。连续监测法要使用生化分析仪，可以测岀酶反应的初

4、速度，结果比”固定时间法“所测的平均速度准确，尤其高浓度标本时更明显。例如：用固定时间法中赖氏法测AITT时，最高测到10倍正常上限，而用连续监测法测定可测到10—100倍正常上限，可以辅助临床医师更好的观察患者的病情变化和治疗的疗效。有一点要注意的是:同样使用连续监测法，同样用国际单位/升报结果，不同实验室的结果可能会有较大的差异，因为连续监测法是通过测酶的催化速度来间接表示酶量的高底，而酶的催化速度受很多因素的影响。（例如湿度、缓冲液等。）另外不同方法，不同仪器的测定结果也会不同。为了防止临床医师产生错误认识（误认为IU/L的结果应

5、该在国际上一致，具有可比性），目前实验室常以U/L的临床报告。所以说临床医师在分析酶的测定结果时，应以测定此酶的实验室的参考值为准，盲目套用文献结果或者与其它实验室结果相比可能会得出不恰当的结论。例如：ALT我们科参考值是5—60U/L,某医院的是：0—WU/L。如果我们测定结果ALT是58,按照某医院0-40的参考值看该结果是异常的。3免疫学方法：利用酶的特性,通过Ag、Ab反应直接测定酶的质量，测定结果用ng/ml,pg/ml报告酶蛋白含量高低。（我们现在测定肌钙蛋白I用的就是免疫学方法。）它与连续监测法相比具有很多优点：①灵敏度高

6、，可达pg/ml的水平①特界性高，不受酶活性测定的影响因素那么多，不受约物干扰②可测定一些不表达酶活性的酶原三临床诊断中常用的血清酶类临床医师多从疾病出发，将酶测定的结呆和其检查结果综合起来，分清主次，辨证地加以应用，对我们检验师而言，还应对具休每个酶有一个较全面的了解。这样才能为临床提供咨询。。肌酸激酶(CK)以前临床常将此酶称CPK,此名称不确切，目前国外已经摒弄不用。CK是由两种不同亚基(M和B)组成的二聚体，正常人休组织常含三种同工酶，按电泳速率快慢顺序分别为：CK—BB(CK1),CK—MB(CK2)和CK—MM(CK3)。1

7、组织分布：CK主要存在于骨骼肌、心肌、脑组织中。2生理差异：年龄、性别和种族对CK含量都有一定影响。3标本的釆集、处理和贮存:虽然红细胞屮不含CK,但含冇大量腺苜激酸酶(AK),目前常用的测CK的酶偶联法的反应体系中含有ADPo生成的ATP在指示酶6■磷酸葡萄糖脱氢酶，生成的ATP在指示酶6■磷酸葡萄糖脱氢酶作用下，可使NAD+生成NADH,340mm处吸光度升高。为去除AK的干扰，不少试剂盒中加入AK抑制剂DAPP和AMPo但也有些试剂中未加入DAPP,此时溶血标本将产生明显干扰。除肝素外，其它常用抗凝剂都能抑致CK活性。如不能及时测

8、定，可将血清放冰箱贮存，—20°C中可长期保存4临床应用(1)急性心肌梗死(2)心肌炎(3)运动实验(4)肌肉损伤肌注药物引起CK升高，一般不超过正常上限2倍，持续不超过一天(5)多发性肌炎与肌炎神经性肌肉