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《成人骨髓间充质干细胞体外定向诱导分化为胰岛样细胞团的研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。
1、.1f盆并乎选瓜第13卷第6期2003年6月成人骨髓间充质干细胞体外定向`诱导分化为胰岛样细胞团的研究李艳华白慈贤谢超陈琳裴雪涛“军事医学科学院输血研究所,北京100850.摘要体外扩增和定向诱导成人骨髓间充质干细胞(MSC)向胰岛样细胞分化从正常成人骨髓中分离MSC,在含10%胎牛血清的a一MEM培养基中对其进行纯化和扩增.用bFGF,EGF等因子、诱导MSC向nestin阳性的祖细胞(NIP)分化;用高糖无血清培养基和日细胞调节素尼克酞胺等.一,,RTPCR法nesnnes,,诱导NIP向胰岛样细
2、胞分化用检测诱导前后ting3了尸Fl胰岛素胰高血,;双硫踪染色鉴定胰岛样的细胞团;nesitn糖素基因的表达免疫组织化学法检测诱导前后胰岛.,,素生长抑素蛋白的表达;放射免疫分析法检测诱导前后细胞分泌胰岛素情况结胰高血糖素,,果表明MSC经第一阶段的诱导后可分化成NIP继续诱导6d后变圆的细胞逐渐增多并聚集成团,双硫赊染色阳性.免疫、、生长组化实验证明经两阶段诱导后的细胞表达胰岛素胰高血糖素抑素等内分.放免分析结果表明诱导的胰岛样细胞团可以分泌胰岛素,糖反应性较弱.以上泌激素结果表明成人骨髓间充质干
3、细胞在体外可以被诱导分化为胰岛样细胞团.这将为解决糖尿病细胞治疗所面临的供者细胞不足、移植排斥反应等问题提供.一个新的方案n关键词骨髓间充质干细胞enist胰岛糖尿病是严重危害人类健康的常见多发病.临行培养,诱导enstin阳性的胰腺干细胞分化为内分床上针对I型及部分H型糖尿病患者仍采用胰岛素泌腺细胞.可见,胚胎干细胞和胰腺干细胞均可成注射疗法,但每天注射胰岛素并不能完全控制血糖为糖尿病细胞治疗的种子细胞.但是,它们又分别水平,也阻止不了糖尿病肾病、中风等并发症的发受到了伦理学争论及取材不便等的限制.
4、生.近几年,经肝内门静脉植入胰岛细胞治疗糖尿间充质干细胞(MSC)是存在于骨髓中的一群均病取得了一些疗效,一些病人在接受胰岛细胞移植质性的非造血细胞.它们易于分离培养扩增,遗传后,能脱离胰岛素治疗,血糖控制的时间可长达1背景稳定,体内植入反应较弱,在特定的诱导条件.,胰岛细胞移植仍面临着两大,、年以上川遗憾的是下可分化为多种中胚层组织细胞如骨细胞软骨.难题:供者来源不足、严重的免疫排斥反应等.干细胞5[]、脂肪细胞、成肌细胞等MSC能否分化成,细胞作为一类具有自我更新及多向分化潜能的细胰岛样细胞呢?2
5、000年wodbury61[等将间充质.,干细胞诱导分化为神经细胞的实验结果给了我们很胞已经逐渐成为人们寻找胰岛细胞的新资源,.胚胎干细胞具有发育的全能性可自发分化[“〕他们在诱导分化开始的大启示sh至6d的时间段.Luy〔3〕,n或经诱导分化为胰岛细胞melsk等先将胚胎中检测到了estin这一神经干细胞特征性标志的干细胞培养成胚状体,然后从中挑选nesitn阳性细表达.胞进行诱导,得到了类似胰岛的能分泌胰岛素的结胰腺干细胞与神经干细胞都表达nestin,这与构.另外,有学者’[]对胰管上皮细胞及胰
6、岛细胞进胰腺与中枢神经系统具有相似的发育机制[,]分不2002一22一21收稿,2003一03一03收修改稿*`”,,国家八六三ZOAAZOSO512O01A2短16151)国家重大基础研究发展规划(200lCB500计划(0296)和北京市科委干细胞重大专项资助项目..**,一a:Emilpeixt@nicbmiaeen联系人f1.鱿并乎选展第,3卷第6期2003年6月开.早期胚胎发育时期,胰岛细胞与神经细胞呈现.Shcudienr许多相同的表型等8[]认为神经生长因子1.2体外诱导Msc向胰岛样细
7、胞团分化可能是胰腺发育的关键信号.我们根据胰腺与神经取第3代以后的MSC按3x105/mL密度接种系统具有相似发育机制的特点,探索了诱导成人骨,ngL,于6孔板中每孔加3mL诱导液1(含10/m碱髓间充质干细胞向胰岛样细胞分化的条件为获得,,性成纤维细胞生长因子(bFGFsIGMA)10gn/mL大量胰岛细胞及解决移植排斥反应寻找新的出路.,表皮细胞生长因子(EGFSIGMA)及2%氏:的1IMDM(IBICO.16d后,材料与方法G)培养液)经诱导液培养去除,PBS,旧培养液用缓冲液洗细胞添加诱导液
8、1.1sc的分离、2(含10ng/mL日细胞调节素(Betaeellulin),10ng/成人M扩增培养,ng-mL肝细胞生长因子(HGF)10/mL活化素(A。成人肋骨由非血液系统疾病病人胸外科手术后获得.无菌条件下,挤出肋骨中的骨髓.向骨髓液tivinA,R&DSYSTEMS)和10mmoL/L尼克酞胺a一7,中加入含10%胎牛血清的MEM(GIBICO)充分混(SIGMA)及2%残的IMDM培养液)继续培养,,.合1500r/min离心5min弃上
