植株全氮、全磷、全钾含量的测定(定1) (1)

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.植株全氮、全磷、全钾的测定一、待测液的制备（H2SO4—H2O2消煮法）二、植株全氮的测定（H2SO4—H2O2消煮，蒸馏法）三、植株全磷的测定（H2SO4—H2O2消煮，钒钼黄比色法）四、植株全钾的测定（H2SO4—H2O2消煮，火焰光度法一、待测液的制备（H2SO4—H2O2消煮法）1H2SO4—H2O2消煮原理植物样品在浓H2SO4溶液中，经过脱水、碳化、氧化等一系列的作用后，易分解的有机物则分解，然后再加入H2O2，H2O2在热的浓H2SO4溶液中会分解出新生态氧，具有强烈的氧化作用，可继续分解没被H2SO4破坏的有机物，使有机态氮全部转化为无机铵盐。同时，样品中的有机磷也转化为无机磷酸盐，故可用同一消煮液分别测定N、P、K（植株中K以离子态存在）。2主要仪器：万分之一电子天平、0.5mm筛、三角瓶（50ml）或消煮管、移液管（5、10ml）+吸耳球、弯颈小漏斗、消煮炉、吸管、漏斗、无磷钾滤纸、容量瓶（100ml）2试剂：浓硫酸（GBT625）：化学纯、比重1.8430%H2O2（GB6684）：阴凉处存放3操作步骤称取烘干、磨细的植物样品(过0.5mm筛)0.19g，置于50ml三角瓶（或消煮管）底部（勿将样品粘附在瓶颈上），加浓硫酸5mL，摇匀（最好放置过夜），瓶口盖一弯颈小漏斗，在电炉上先缓缓加热，待浓硫酸分解冒大量白烟时再升高温度（在消煮炉上先250℃消煮—温度稳定后计时，时间约30min，待浓硫酸分解冒大量白烟时再升高温度至400℃）。消煮至溶液呈均匀的棕黑色时，取下三角瓶，稍冷后提起弯颈漏斗，滴加30%H2O210滴，并不断摇动三角瓶。再加热(微沸)约7-10min，取下，稍冷后重复滴加30%H2O25~10滴，再消煮。如此反复进行3-5次，每次添加的H2O2应逐次减少，消煮至溶液呈无色或清亮后，再加热5-10min（以赶尽剩余的H2O2)，取下三角瓶冷却，用少量水冲洗漏斗，洗液流入三角瓶中。将消煮液无损地洗入100ml容量瓶中，用水定容，摇匀。过滤或放置澄清后供氮、磷、钾测定。二、植株全氮的测定（H2SO4—H2O2消煮，蒸馏法）1、方法原理     蒸馏过程的反应：（NH4)2SO4+NaOH→Na2SO+2NH3+2H2O     NH3+H2O →NH4OH     NH4OH+H3BO3 →NH4·H2BO3 +H2O   滴定过程的反应：     NH4·H2BO3+H2SO4→（NH4)2SO4+2H3BO32、主要仪器、试剂（1）主要仪器：万分之一电子天平、移液枪(2ml)、移液管（5、10ml）、三角瓶（50、150ml）、容量瓶（100、1000ml）、量筒、研钵、酸式滴定管、pH仪、定氮仪（2）需用的试剂：40%NaOH溶液（10mol/L氢氧化钠溶液）：称取40g氢氧化钠（GB629分析纯）溶于100ml水中硫酸（GB625—77）：分析纯，0.005mol/L硫酸（将0.01mol/L硫酸标准溶液用水稀释一倍）或0.01mol/L盐酸标准溶液0.02mol/L硫酸标准溶液：量取浓硫酸（C.R）2.83ml，加蒸馏水稀释至5000ml，此为0.02mol/L的（1/2H2SO4）标准溶液，然后用标准碱或硼砂标定之，将0.02mol/L的（1/2H2SO4）标准溶液用水稀释4倍。硼酸—指示剂溶液：.. .硼酸-指示剂混合液：每升A溶液中加20mlB混合指示剂，并用稀碱调节至红紫色（pH值约4.5）。此液放置时间不宜过长，如在使用过程中pH值有变化，需随时用稀酸或稀碱调节之。A2％硼酸溶液：20g硼酸（GB628-78分析纯）溶于1L约60℃去离子水中。B甲基红-溴甲酚绿混合指示剂：0.5g溴甲酚绿（HG3-1220-79）和0.1g甲基红（HG3-958-76）于研钵中，加入少量95％乙醇，研磨至指示剂全部溶解后，加95％乙醇至100ml。pH4.5的水3、测定步骤在150ml三角瓶中，加入2％硼酸-指示剂混合液5ml，放在定氮仪冷凝管末端，管口置于硼酸液面以上3～4cm处。之后吸取待测液10.00mL（含NH4+-N约1mg）置于蒸馏器的定氮内室中，于定氮仪相应位置上，盖上具塞并密封使之不漏气。然后从加液漏斗处向蒸馏室内缓缓加入20ml10mol/L氢氧化钠溶液，立即关紧蒸汽发生器上排气口的旋钮，同时打开蒸汽发生器和定氮冷凝管连接橡皮管上的夹子。通入蒸汽蒸馏，蒸馏约15min左右，馏出液体积约50ml时，即蒸馏完毕。取下三角瓶，关闭蒸汽发生器和定氮冷凝管连接橡皮管上的夹子，并打开蒸汽发生器上排气口的旋钮。用少量已调节至pH4.5的水洗涤冷凝管的末端，取下三角瓶。之后，用气压差的原理，倒吸的方法洗蒸馏瓶中的废液，洗净蒸馏瓶。用0.005mol/L硫酸（或0.01mol/L盐酸）标准溶液滴定馏出液由蓝绿色至刚变为紫红色。记录所用酸标准溶液的体积（ml）。空白测定所用酸标准溶液的体积，一般不得超过0.4ml。4、结果计算植株中N（%）=（V1-V0）×C×14×D×10-3×100/m式中：V1——样品测定所消耗标准酸mL数；      V0——空白试验所消耗标准酸mL数；      C——标准酸（H+1）的浓度mol·L-1；·      14——氮原子的摩尔质量（g·mol）；      10-3——mL换算为L；      D——分取倍数，定容体积/分取体积，100/10      m——干样品质量（g）。5、注意事项（1）碱液要过量。要求中和完硫酸后再过量2mL；（2）蒸馏装置不能漏气；（3） 硼酸要足量。估算方法：按1mL浓度为10.0g·L-1的硼酸能吸收0.46mg的N计算；（4）指示剂和硼酸最好分开配置保存。因二者混合过久，有指示终点不明显的可能。（5） 指示剂和硼酸的pH要调到4.5（变色点）。（6）定氮仪参数设置中，加碱量设置为3S；定氮仪开机预热后，要多空蒸几次，等读数稳定后再进行样品测定。三、植株全磷的测定（H2SO4—H2O2消煮，钒钼黄比色法）1、方法原理在酸性条件下，正磷酸能与偏钒酸和钼酸发生反应，形成黄色的三元杂多酸—钒钼磷酸。溶液黄色稳定，黄色的深浅与磷的含量成正相关，所以，可用比色法测定溶液中磷的含量。2、主要仪器、试剂（1）主要仪器：万分之一电子天平、电磁炉、移液管（1、5、10ml2个）、吸耳球、容量瓶（50ml8个、100、1000ml）、量筒吸管、塑料瓶、棕色瓶、pH试纸、烘箱722或723型分光光度比色计（2）试剂浓硝酸(分析纯)0.2%二硝基酚指示剂（0.25g2,6-二硝基酚或2,4-二硝基酚溶于100ml水中，其变色范围是pH2.4（无色）—4.0（黄色），变色点是pH3.1）6mol/LNaOH溶液（24gNaOH(分析纯)溶于水，稀释至100ml）.. .磷标准液50ug·mL-1（准确称取经105℃烘干的KH2PO4(分析纯)0.2195g溶于水，移入1L容量瓶，加水约400ml，加入5ml浓H2SO4（或浓硝酸），用水定容，装入塑料瓶中低温保存）。钒钼酸铵试剂：A液：将25.0g的钼酸铵［(NH4)6Mo7O24·4H2O，分析纯］溶于400mL水中。B液：将1.25g的偏钒酸铵(NH4VO3，分析纯)溶于300mL沸水中，冷却后，加入250mL浓硝酸(分析纯)，冷却至室温。将A液缓缓注入B液中，不断搅匀，加水稀释到1L，贮入棕色瓶中。3、测定步骤吸取消煮好的待测液20.00mL（含P0.05~1.0mg）置于50ml容量瓶中，加2,6-二硝基酚（或2,4-二硝基酚)指示剂2滴，用6mol·L-1NaOH调pH至刚显黄色，准确加入钒钼酸铵试剂10.00mL，用水定容，摇匀。同时做空白实验。15min后，用分光光度计在450nm处比色，以空白液调节吸光值的零点。  标准曲线制作：准确吸取50ug·mL-1的P标准溶液0、1.0、2.5、5、7.5、10.0、15.0mL，于50mL容量瓶中，加与吸取的待测液等量的空白消煮液，同上述操作步骤显色和比色。该标准系列P的浓度分别为0、1.0、2.5、5、7.5、10.0、15.0ug·mL-1P。4、结果计算植株全P(%)=ρ·V×分取倍数×10-4/m 式中：ρ——从标准曲线查得显色液P的质量浓度(ug/mL)      V——显色液体积(mL)分取倍数：定容体积/分取体积，100/10      m——烘干样品质量（g）10－4—将ug/L浓度单位换算为百分含量的换算因数5、注意事项显色液的酸度要求在0.04~1.6mol.L-1H+内，酸度过高时，显色不完全或不显色，酸度太低时则可能生成沉淀或其它物质的颜色；比色要在15min后、24h内完成。四、植株全钾的测定（H2SO4—H2O2消煮，火焰光度法）1、方法原理植物体内的钾几乎全部以离子状态存在于植物组织中，样品经消煮或浸提，并经稀释后，待测液中的K可用火焰光度法测定。2、主要仪器、试剂（1）主要仪器：容量瓶（50ml8个、1000ml）；移液管(1.0、5.0、10ml)+吸耳球、火焰光度计。（2）试剂：100ug·mL-1K标准溶液（准确称取在105℃干燥2h后的0.1907gKCl，溶于水，于1L容量瓶中定容，存于塑料瓶中。 3、测定步骤吸取消煮好的待测液5.000mL（含K10mg/L~50mg/L），置于50mL容量瓶，用水定容，摇匀，直接在火焰光度计上测定，读取检流计读数。标准曲线制作：准确吸取100ug·mL-1Ｋ标准溶液0，0.5，1.0，2.5，5.0，10，20ml，分别放入50ml容量瓶中，加入与吸取的待测液等量的空白消煮液，加水定容即得0，1，2，5，10，20，40mg/LK的标准系列溶液。以浓度最高的标准溶液定火焰光度计检流计的满度，然后从稀到浓依次进行测定，记录检流计读数，以检流计读数为纵坐标绘制标准曲线。4、结果计算植株全钾(%)=ρ·V×分取倍数×10-4/m  式中：ρ：从标准曲线查得显色液K的质量浓度(ug·mL-1)V：测定液体积(mL)50ml分取倍数：定容体积/分取体积，100/10m：烘干样质量（g)10－4：将ug/L浓度单位换算为百分含量的换算因数5、注意事项(1)按要求制作标准曲线；  (2)标准溶液和待测液的组成要基本相同。因为，溶液组成的改变（包括酸碱、阴、阳离子的浓度）对测定结果有影响；(3)仪器状态（如空气压力、火焰的状态等）对测定结果有影响。.. .植物全氮、磷、钾的测定植物中氮、磷、钾的测定包括待测液的制备和氮磷钾的定量两大步骤。植物全氮待测液的制备通常用开氏消煮法(参考有机肥料全氮的测定)。植物全磷、钾可用干灰化或其他湿灰化法制备待测液。本书介绍H2SO4—H2O2消煮法，可用同一份消煮液分别测定氮、磷、钾以及其它元素(如钙、镁、铁、锰等)。一、植物样品的消煮(H2SO4—H2O2法)方法原理植物中的氮磷大多数以有机态存在，钾以离子态存在。样品经浓H2SO4和氧化剂H2O2消煮，有机物被氧化分解，有机氮和磷转化成铵盐和磷酸盐，钾也全部释出。消煮液经定容后，可用于氮、磷、钾等元素的定量。本法采用H2O2加速消煮剂，不仅操作手续简单快速，对氮磷钾的定量没有干扰，而且具有能满足一般生产和科研工作所要求的准确度，但要注意遵照操作规程的要求操作，防止有机氮被氧化成N2或氮的氧化物而损失。试剂：(1)硫酸(化学纯、比重1.84)(2)30%H2O2（分析纯)操作步骤：(1)常规消煮法称取植物样品(0.5mm)0.3～0.5g(准确至0.0002g)装入100ml开氏瓶的底部，加浓硫酸5ml，摇匀(最好放置过夜)，在电炉上先小火加热，待H2SO4发白烟后再升高温度，当溶液呈均匀的棕黑色时取下，稍冷后加6滴H2O2，再加热至微沸，消煮约7—10分钟，稍冷后重复加H2O2再消煮，如此重复数次，每次添加的H2O2应逐次减少，消煮至溶液呈无色或清亮后，再加热约10分钟，除去剩余的H2O2，取下冷却后，用水将消煮液无损转移入100ml容量瓶中，冷却至室温后定容(V1)。用无磷钾的干燥滤纸过滤，或放置澄清后吸取清液测定氮、磷、钾。每批消煮的同时，进行空白试验，以校正试剂和方法的误差。　(2)快速消煮法称取植物样品(0.5mm)0.3～0.5g(称准至0.0002g)，放入100ml开氏瓶中，加1ml水润湿，加入4ml浓H2SO4摇匀，分两次各加入H2O22ml，每次加入后均摇匀，待激烈反应结束后，置于电炉上加热消煮，使固体物消失成为溶液，待H2SO4发白烟，溶液成褐色时，停止加热，此过程约需10分钟。待冷却至瓶壁不烫手，加入H2O22ml，继续加热消煮约5—10分钟，冷却，再加入H2O2消煮，如此反复一直至溶液呈无色或清亮后(一般情况下，加H2O2总量约8-10ml)再继续加热5-10分钟，以除尽剩余的H2O2。取下冷却后用水将消煮液定量地转移入100ml容量瓶中，定容(V1)。同时做空白试验，校正试剂和方法误差。注释：①植物体内的钾以离子态存在于细胞液或与有机成分呈现松散结合态。因此，若只测定钾时，可采用简易的浸提法制备待测液。浸提剂可用0.5mol/LHCl或2mol/LNH4AC～0.2mol/LMg(OAC)2溶液，也可用热水。②所用的H2O2应不含氮和磷。H2O2在保存中可能自动分解，加热和光照能促其分解，故应保存于阴凉处。在H2O2中加少量H2SO4酸化，可阻止H2O2分解。二、植物全氮的测定(半微量蒸馏法和扩散法)　方法原理植物样品经开氏消煮、定容后，吸取部分消煮液碱化，使铵盐转变成氨，经蒸馏和扩散，用H3BO3吸收，直接用标准酸滴定，以甲基红—溴甲酚绿混合指示剂指示终点。试剂：(1)40%(m/v)NaOH溶液　称取工业用氢氧化钠(NaOH)400g，加水溶解不断搅拌，再稀释定容至1000ml贮于塑料瓶中。(2)2%H3BO3—指示剂溶液　称取20g硼酸加入热蒸馏水(60℃)溶解，冷却后稀释定容至1000ml，最后用稀盐酸(HCl)或稀氢氧化钠(NaOH)调节pH至4.5(定氮混合指示剂显葡萄酒红色)。(3)取标准溶液［C(HCl或1/2H2SO4)=0.01mol/L］(4)碱性溶液　(5)定氮混合指示剂。称取0.1g甲基红和0.5g溴甲酚绿指示剂放入玛瑙研钵中，加入100ml95%酒精研磨溶解，此液应用稀盐酸(HCl)或氢氧化钠(NaOH)调节pH至4.5。(6)0.02mol/L盐酸标准溶液。取浓盐酸(HCl)(比重1.19)1.67ml，用蒸馏水稀释定容至1000ml，然后用标准碱液或硼砂标定。操作步骤：　(1)蒸馏法吸取定容后的消煮液5.00—10.00ml，(V2，含NH4—N约1ml)，注入半微量蒸馏器的内室，另取150ml三角瓶，内加入5ml2%H3BO3—指示剂溶液，放在冷凝管下端，管口置于H3BO3液面以下，然后向蒸馏器内室慢慢加入约3ml40%(m/v)NaOH溶液，通入蒸气蒸馏，(注意开放冷凝水，勿使馏出液的温度超过40℃)待馏出液体积约达50～60ml.. .时，停止蒸馏，用少量已调节至pH为4.5的水冲洗冷凝管末端。用酸标准溶液滴定馏出液至由蓝绿色突变为紫红色(终点的颜色应和空白测定的终点相同)。用酸标准溶液，同时进行空白液的蒸馏测定，以校正试剂和滴定误差。　(2)扩散法吸取定容后的消煮液200～500ml(V2，含NH4—N0.05—0.5mg)于10厘米的扩散皿外室。内室加入2%H3BO3—指示剂溶液3ml，参照土壤碱解氮测定的操作步骤进行扩散和滴定，但中和H2SO4需用40%NaOH溶液2ml，扩散可在室温下进行，不必恒温，室温在20℃以上时，放置约24h，低于20℃时，须放置较长时间。在扩散期间，可将扩散皿内容物小心转动混匀2～3次，加速扩散，可缩短扩散时间。在测定样品的同时，须在同一条件下做空白试验。　结果计算　全N%=C(V-V0)×0.041×100/(m×V2/V1)式中　C—酸标准溶液浓度，mol/L；V—滴定试样所用的酸标准液，ml；V0—滴定空白所用的酸标准液，ml；0.041—N的毫摩尔质量，g/mmol；m—称样量，g；V1—消煮液定容体积，ml；V2—吸取测定的消煮液体积ml。三、植物全磷的测定(钒钼黄吸光光度法)　方法原理植物样品经浓H2SO4消煮使各种形态的磷转变成磷酸盐。待测液中的正磷酸与偏钒酸和钼酸能生成黄色的三元杂多酸，其吸光度与磷浓度成正比，可在波长400～490nm处用吸光光度法测定磷。磷浓度较高时选用较长的波长，较低时选用较短的波长。此法的优点是操作简便，可在室温下显色，黄色稳定。在HNO3，HCl,HClO4和H2SO4等介质中都适用，对酸度和显色剂浓度的要求也不十分严格，干扰物小。在可见光范围内灵敏度较低，适测范围广(约为1—20mg/L，P)，故广泛应用于含磷较高而且变幅较大的植物和肥料样品中磷的测定。　试剂：(1)钒钼酸铵溶液25.0g钼酸铵［(NH4)6Mo7O24·4H2O分析纯］溶于400ml水中，另将25g偏钒酸铵(NH4VO3，分析纯)溶于300ml沸水中，冷却后加入250ml浓HNO3(分析纯)。将钼酸铵溶液缓缓注入钒酸铵溶液中，不断搅匀，最后加水稀释到1L，贮入棕色瓶中。(2)6mol/LNaOH溶液24gNaOH溶于水，稀释至100ml；　(3)0.2%二硝基酚指示剂0.2g2，6—二硝基酚或2，4—二硝基酚溶于100ml水中；　(4)磷标准液［C(P)＝50mg/L］0.2195g干燥的KH2PO4(分析纯)溶于水，加入5ml浓HNO3，于1L容量瓶中定容。操作步骤：吸取定容、过滤或澄清后的消煮液10.00ml(V2含磷0.05～0.75mg)放入50ml容量瓶中，加2滴二硝基酚指示剂，滴加6mol/LNaOH中和至刚呈黄色，加入10.00ml钒钼酸铵试剂，用水定容(V3)。15分钟后用1cm光径的比色杯在波长440mm处进行测定，以空白溶液(空白试验消煮液按上述步骤显色)调节仪器零点。　标准曲线或直线回归方程准确吸取50mg/LP标准液0，1，2.5，5，7.5，10，15ml分别放入50ml容量瓶中，按上述步骤显色，即得0，1.0，2.5，5.0，7.5，10，15mg/LP的标准系列溶液，与待测液一起测定，读取吸光度，然后绘制标准曲线或求直线回归方程。　结果计算　全P%＝C(P)×(V1/m)×(V3/V2)×10－4式中C(P)—从校准曲线或回归方程求得的显色液中磷浓度，mg/L；　V3—显色液体积，ml；　V2—吸取测定的消煮液体积，ml；　V1—消煮液定容体积，ml；　m—称样量，g；　10－4—将mg/L浓度单位换算为百分含量的换算因数。注释　①显色液中(CP)＝1-5mg/L时，测定波长用420nm；5—20mg/L，用490nm。待测液中Fe3+浓度高的选用450nm，以消除Fe3+干扰。校准曲线也应用同样波长测定绘制。　②一般室温下，温度对显色影响不大，但室温太低(如＜15℃＝时，需显色30分钟，稳定时间可达24小时；　③如试液为HCl，HClO4介质，显色剂应用HCl配制；试液为H2SO4介质，显色剂也用H2SO4配制。显色液酸的适宜浓度范围为.. .0.2～1.6mol/L，最好是0.5～1.0mol/L，酸度高显色慢且不完全，甚至不显色，低于0.2mol/L，易产生沉淀物，干扰测定。钼酸盐在显色液中的终浓度适宜范围为1.6×10-3~10-2mol/L，钡酸盐为8×10-5~2.2×10-3mol/L。④此法干扰离子少，干扰离子是Fe3+，当显色液中Fe3+浓度超过0.1%时，它的黄色有干扰。可用扣除空白法消除。UV254测定一、实验仪器：紫外分光光度计、1cm石英比色皿。真空抽滤机。过滤装置：孔径为0.45μm的滤膜。清洗滤膜和过滤装置时应保证至少50mL不含有机物的清洗水通过滤膜。清洗水：DOC含量低于0.3mg/L的双蒸馏水。二、操作过程水样的制备：将水样通过过滤装置,去除水中悬浮物质和非溶解性有机物。分光光度法测定：以去离子水作为空白对照，在254nm波长、室温下测定。色度测定一、主题内容与适用范围1、本标准规定了两种测定颜色的方法。本标准测定经15min澄清后样品的颜色。pH值对颜色有较大影响，在测定颜色时应同时测定pH值。　　1.1铂钴比色法参照采用国际标准ISO7887—1985《水质颜色的检验和测定》。铂钴比色法适用于清洁水、轻度污染并略带黄色调的水，比较清洁的地面水、地下水和饮用水等。　　1.2稀释倍数法适用于污染较严重的地面水和工业废水。　　两种方法应独立使用，一般没有可比性。　　样品和标准溶液的颜色色调不一致时，本标准不适用。2、定义:本标准定义取自国际照明委员会第17号出版物（CIEpublicationNo.17），采用下述几条。　　2.1水的颜色:　改变透射可见光光谱组成的光学性质。　　2.2水的表观颜色:由溶解物质及不溶解性悬浮物产生的颜色，用未经过滤或离心分离的原始样品测定。　　2.3水的真实颜色:仅由溶解物质产生的颜色。用经0.45μm滤膜过滤器过滤的样品测定。2.4色度的标准单位，度：在每升溶液中含有2mg六水合氯化钴(Ⅳ)和1mg铂[以六氯铂(Ⅳ)酸的形式]时产生的颜色为1度。二、铂钴比色法1、原理:用氯铂酸钾和氯化钴配制颜色标准溶液，与被测样品进行目视比较，以测定样品的颜色强度，即色度。　　样品的色度以与之相当的色度标准溶液的度值表示。　　注：此标准单位导出的标准度有时称为“Hazen际”或“Pt－Co标”[GB3143《液体化学产品颜色测定法(Hazcn单位——铂－钴色号）》]、或毫克铂/升。2、试剂:　除另有说明外，测定中仅使用光学纯水及分析纯试剂。　2.1光学纯水：将0.2μm。滤膜(细菌学研究中所采用的)在100mL蒸馏水或去离子水中浸泡1h，用它过滤250mL蒸馏水或去离子水，弃去最初的250mL，以后用这种水配制全部际准溶液并作为稀释水。2.2色度标准储备液，相当于500度：将1.245±0.001g六氯铂(Ⅳ)酸钾(K2PtC16)及1.000±0.001g六水氯化钴(Ⅳ)(CoCl2·6H2O)溶于约500mL水中，加100±1mL盐酸(ρ=1.18g/mL)并在1000mL的容量瓶内用水稀释下标线。　　将溶液放在密封的玻璃瓶中，存放在暗处，温度不能超过30℃。个溶液至少能稳定6个月。　　2.3色度标准溶液：在一组250mL的容量瓶中，用移液管分别加入2.50、5.00、7.50、10.00、12.50、15.00、17.50、20.00、30.00及35.00mL储备液，并用水稀释至标线。溶液色度分别为：5、10、15、20、25、30、35、40、50、60和70度。　　溶液放在严密益好的玻璃瓶中，存放于暗处。温度不能超过30℃。这些溶液至少可稳定1个月。3、仪器　　常用实验室仪器和以下仪器。　具塞比色管，50mL。规格一致，光学透明玻璃底部无阴影。　pH计，精度±0.1pH单位。　　容量瓶，250mL。4、采样和样品　　所用与样品接触的玻璃器皿都要用盐酸或表面活性剂溶液加以清洗，最后用蒸馏水或去离了水洗净、沥干。.. .　　将样品采集在容积至少为1L的玻璃瓶内，在采样后要尽早进行测定。如果必须贮存，则将样品贮于暗处。在有些情况下还要避免样品与空气接触。同时要避免温度的变化。5、步骤　　5.1试料:将样品倒入250mL(或更大)量筒中，静置15min，倾取上层液体作为试料进行测定。　5.2测定:将一组具塞比色管用色度标准溶液充至标线。将另一组具塞比色管用试料充至标线。　　将具塞比色管放在白色表面上，比色管与该表面应呈合适的角度，使光线被反射自具塞比色管底部向上通过液柱。　　垂直向下观察液柱，找出与试料色度最接近的标准溶液。　　如色度≥70度，用光学纯水将试料适当稀释后，使色度落入标准溶液范围之中再行测定。另取试料测定pH值。6、结果的表示　　以色度的际准单位报告与试料最接近的标准溶液的值，在0～40度(不包括40度)的范围内，准确到5度。40～70度范围内，准确到10度。　　在报告样品色度的同时报告pH值。稀释过的样品色度(A0)，以度计，用下式计算：　　式中：V1——样品稀释后的体积，mL；　　V0——样品稀释前的体积，mL；　　A1——稀释样品色度的观察值，度。三、稀释倍数法1、原理:将样品用光学纯水稀释至用目视比较与光学纯水相比刚好看不见颜色时的稀释倍数作为表达颜色的强度，单位为倍。　　同时用目视观察样品，检验颜色性质：颜色的深浅(无色，浅色或深色)，色调(红、橙、黄、绿、蓝和紫等)，如果可能包括样品的透明度(透明、混浊或不透明)。用文字予以描述。　　结果以稀释倍数值和文字描述相结合表达。2、试剂2.1光学纯水。3、仪器3.1实验室常用仪器及具塞比色管、pH计。4、采样和样品同3.4条5、步骤　　5.1试料同第3.5.l条。　　5.2测定　　分别取试料和光学纯水于具塞比色管中，充至标线，将具塞比色管放在白色表面上，具塞比色管与该表面应呈合适的角度，使光线被反射自具塞比色管底部向上通过液柱。垂直向下观察液柱，比较样品和光学纯水，描述样品呈现的色度和色凋，如果可能包括透明度。　　将试料用光学纯水逐级稀释成不同倍数，分别置于具塞比色管井充至标线。将具塞比色管放在白色表面上，用上述相同的方法与光学纯水进行比较。将试料稀释至刚好与光学纯水无法区别为止，记下此时的稀释倍数值。　　稀释的方法：试料的色度在50倍以上时，用移液管计量吸取试料于容量瓶中，用光学纯水稀至标线，每次取大的稀释比，使稀释后色度在50倍之内。　　试料的色度在50倍以下时，在具塞比色管中取试料25mL，用光学纯水稀至标线，每次稀释倍数为2。　　试料或试料经稀释至色度很低时，应自具塞比色管倒至量筒适量试料并计量，然后用光学纯水稀至标线，每次稀释倍数小于2。记下各次稀释倍数值。　　另取试料测定pH值。6、结果的表示　　将逐级稀释的各次倍数相乘，所得之积取整数值，以此表达样品的色度。　　同时用文字描述样品的颜色深浅、色调，如果可能，包括透明度。　　在报告样品色度的同时，报告pH值。.. .植物氮、磷、钾全量分析植物中氮、磷、钾测定包括待测液制备和氮、磷、钾定量2大步骤。1植物全氮、磷、钾含量测定—待测液制备（H2SO4+H2O2消煮法）1.1适用范围：本方法不包括硝态氮的植物全氮测定，适合于含硝态氮低的植物样品的测定。1.2方法提要植物中的氮、磷大多数以有机态存在，钾以离子态存在。样品经浓H2SO4和氧化剂H2O2消煮，有机物被氧化分解，有机氮和磷转化成铵盐和磷酸盐，钾也全部释出。消煮液经定容后，可用于氮、磷、钾等元素的定量。采用H2O2为加速消煮的氧化剂，不仅操作手续简单快速，对氮、磷、钾的定量没有于扰，而且具有能满足一般生产和科研工作所要求的准确度。但要注意遵照操作规程的要求操作，防止有机氮被氧化成N2气或氮的氧化物而损失。1.3试剂1.3.1硫酸(化学钝，比重1.84)；+1.3.230％H2O2(分析纯)。1.4主要仪器设备1.4.1消煮炉1.5操作步骤称取植物样品(0.5mm)0．3g~0．5g（称准至0．0002g）装入100mL凯氏瓶或消煮管的底部，加浓H2SO45mL，摇匀，放置过夜。第二天在电炉或消煮炉上先小火加热，待H2SO4发白烟后再升高温度，当溶液呈均匀的棕黑色时取下。稍冷后加10滴H2O2，再加热至微沸，消煮约7～10min，稍冷后重复加H2O2，再消煮。如此重复数次，每次添加的H2O2应逐次减少，消煮至溶液呈无色或清亮后，再加热约10min，除去剩余的H2O2。取下冷却。用水将消煮液无损地转移入100mL容量瓶中，冷却至室温后定容(V1)。用无磷钾的干滤纸过滤，或放置澄清后吸取清液测定氮、磷、钾。每批消煮的同时，进行空白试验，以校正试剂和方法的误差。1.６注意事项1.6.1所用的H2O2应不含氮和磷。H2O2在保存中可能自动分解，加热和光照能促使其分解，故应保存于阴凉处。在H2O2中加入少量H2SO4酸化，可防止H2O2分解。1.6.2称样量决定于NPK含量，健状茎叶称0．5g，种子0．3g，老熟茎叫可称1g，若新鲜茎叶样，可按干样的5倍称样。称样量大时，可适当增加浓H2SO4用量。1.6.3加H2O2时应直接滴入瓶底液中，如滴在瓶颈内壁上，将不起氧化作用，若遗留下来还会影响磷的显色。2植物全氮测定——半微量蒸馏法2.1适用范围：适合于各种植物样品消煮液中氮的定量。2.2方法原理：植物样品经开氏消煮、定容后，吸取部分消煮液碱化，使铵盐转变成氨，经蒸馏，用H3BO3吸收，硼酸中吸收的氨可直接用标准酸滴定，以甲基红—溴甲酚绿混合指示剂指示终点。2.3试剂2.3.1NaOH溶液：400g／L。2.3.2H3BO3—指示剂溶液：20gL／。2.3.3酸标准溶液(c(HCI或1／2H2SO4)：0.01mol／L。标定见HG/T2843.2.4仪器设备2.4.1蒸馏装置或半自动蒸馏仪。2.5蒸馏:检查蒸馏装置是否漏气和管道是否洁净后，打开蒸馏仪开关，空蒸30分钟。准确吸取定容后的消煮液5.00—10.00mL(V2，含NH4-N约1mg)，注入半微量蒸馏器的消化管内。另取150mL三角瓶，内加5mL2％H3BO3，指示剂溶液，放在冷凝管下端，管口置于H3BO3液面以上3～4cm处，然后向蒸馏器内慢慢加入约3mL400g／LNaOH溶液，通入蒸气蒸馏(注意开放冷凝水，勿使馏出液的温度超过40'C)。待馏出液体积约达50—60mL时，停止蒸馏，用少量已调节至PＨ4.5的水冲洗冷凝管末端。用酸标准溶液滴定馏出液至由蓝绿色突变为紫红色(终点的颜色应和空白测定的滴定终点相同)。与此同时进行空白测定的蒸馏、滴定，以校正试剂和滴定误差。2.6结果计算全(N)，％=c(HCl)X(V—V0)X0.014XDXl00／m；.. .式中：c(HCl)—酸标准溶液的浓度，mol／L；　　　　　V—滴定试样所用的酸标准液体积，mL；　　　　　V0—滴定空白所用的酸标准液，mL：　　　0.014—N的摩尔质量，kg／mol；　　　　m—称样量，g：　　　　D—分取倍数(即消煮液定容体积V1／吸取测定的体积V2)。3植物全磷的测定（钒钼黄吸光光度法）3.1适用范围：适合于含磷量较高的植物样品的测定(如籽粒样品)。3.2方法原理：植物样品经浓H2SO4消煮使各种形态的磷转变成磷酸盐。待测液中的正磷酸与偏钒酸和钼酸能生成黄色的三元杂多酸，其吸光度与磷浓度成正比，可在波长400～490nm处用吸光光度法测定。磷浓度较高时选用较长的波长，较低时选用较短波长。此法的优点是操作简便，可在室温下显色，黄色稳定。在HNO3、HCIO4，和H2SO4等介质中都适用，对酸度和显色剂浓度的要求也不十分严格，干扰物少。在可见光范围内灵敏度较低，适测范围广(约为1—20mg／LP)，故广泛应用于含磷较高而且变幅较大的植物和肥料样品中磷的测定。3.3试剂3.3.1钒钼酸铵溶液：25.0g钼酸铵((NH4)6Mo7O2.4H2O，分析纯)溶于400mL水中，必要时可适当加热，但温度不得超过60℃。另将1.25g偏钒酸铵(NH4VO3，分析纯)溶于300mL沸水中，冷却后加入250mL浓HNO3（（分析纯）。将钼酸铵溶液缓缓注入钒酸铵溶液中，不断搅匀，最后加水稀释至1L，贮于棕色瓶中。3.3.2NaOH溶液(c=6mol／L)：24gNaOH溶于水，稀释至100mL。3.3.3二硝基酚指示剂(p=2g/L)：0.2g2,6-二硝基酚或2.4---二硝基酚溶于100mL水中。3.3.4磷标准溶液(P=50mg／L)：0.2195g(干燥的KH2PO4(分析纯)溶于水，加入5mL浓HNO3，于1L容量瓶中定容。3.4主要仪器设备3.4.1分光光度计。3.5分析步骤准确吸取定容、过滤或澄清后的消煮液5—20mL(V2：，含P0.05—0,75mg)放入50mL容量瓶中，加2滴二硝基酚指示剂，滴加6mol／LNaOH中和至刚呈黄色，加入10.00mL钒钼酸铵试剂，用水定容(V3)。15min后，用1cm光径的比色槽在波长440nm处进行测定，以空白溶液(空白试验消煮液按上述步骤显色)，调节仪器零点。校准曲线或直线回归方程：准确吸取50mg／L　P标准液0，1，2.5，7.5，10，15mL分别放入50mL容量瓶中，按上述步骤显色，即得0，1.0，2.5，5.0，7.5，10，15mg／LP的标准系列溶液，与待测液一起进行测定，读取吸光度。然后绘制校准曲线或求直线回归方程。３.６结果计算　全(ｐ)，％=PX　V　X（V3／V2）)X10-4／m；式中：　P——从校准曲线或回归方程求得的显色液中磷的质量浓度，mg／L：　　　　　V——消煮液定容体积，mL；　　　　　V2——吸取测定的消煮液体积，mL；，　　　　　V3——显色液体积，mL：　　　　　m——称样量，ｇ：　　　　　10-4——将mg／L浓度单位换算为百分含量的换算因数。3.7注意事项3.7.1显色液中P＝1～5mg／L时，测定波长用420nm；5～20mg／L，用490nm。待测液中Fe３+浓度高应选用450nm，以清除Fe３+干扰。校准曲线也应用同样波长测定绘制。3.7.2一般室温下，温度对显色影响不大，但室温太低(如<15℃)时，需显色30min。稳定时间可达24h。3.7.3如试液为HCI、HClO4介质，显色剂应用HCl配制；试液为H2SO4介质，显色剂也用H2SO4配制。显色液酸的适宜浓度范围为0.2—1.6mol／L，最好是0.5～1.0mol／L。酸度高显色慢且不完全，甚至不显色：低于0.2moI／L易产生沉淀物，干扰测定。钼酸盐在显色液中的终浓度适宜范围为1.6X10--3～10-2mol／L，钒酸盐为8X10-5一2.2X10-3mol／L。3.7.4此法干扰离子少。主要干扰离子是铁，当显色液中Fe3+浓度超过0.1％时，它的黄色有干扰，可用扣除空白消除。４植物全磷的测定（钼锑抗吸光光度法）4.1适用范围：适合于含磷量较低的植物样品的测定(如茎秆样品等)。.. .4.2方法提要：植物样品经浓H2SO4消煮使各种形态的磷转变成磷酸盐。在一定酸度下，待测液中的正磷酸与钼酸铵和酒石酸锑钾生成一种三元杂多酸，后者在室温下能迅速被抗坏血酸还原为蓝色络台物，可用吸光光度法测定。4.3试剂4.3.16mol／LNaOH溶液4.3.20.2％二硝基酚指示剂4.3.32mol／L(1／2H2SO4)硫酸溶液：5.6mL浓H2SO4，加水至100mL。4.3.4钼锑贮存液：浓H2SO4(分析纯)126mL缓慢地注入约400mL水中，搅拌，冷却。10.0g鉬酸铵(分析纯)溶解于约60℃的300mL水中，冷却。然后将H2SO4溶液缓缓倒入钼酸铵溶液中，再加入100mL0.5％酒石酸锑钾（KSbOC4O6·1／2H2O,分析纯）溶液，最后用水稀释至1L，避光贮存。此贮存液含钼酸铵为l％，酸浓度为c(1／2H2SO4)=4.5mol／L。4.3.5钼锑抗显色剂：1.50g抗坏血酸(C6H8O6，左旋，旋光度+21一+22，分析纯)溶于100mL钼锑贮存液中。此液须随配随用，有效期一天，冰箱中存放，可用3～5天。4.3.6磷标准工作液(P)=5mg／L：吸取100rng／LP标准贮存液稀释20倍，即为5mg／LP标准工作溶液，此溶液不宜久存。４.４主要仪器设备：同上。４.５分析步骤吸取定容过滤或澄清后的消煮液2.00—5.00mL(V2，含P5～30ug)于50mL容量瓶中，用水稀释至约30mL，加l-2滴二硝基酚指示剂，滴加6mol／LNaOH溶液中和至刚呈黄色，再加入1滴2mol／L(1／2H2SO4)溶液，使溶液的黄色刚刚褪去，然后加入钼锑抗显色剂5.00mL，摇匀，用水定容(V3)。在室温高于15℃的条件下放置30min后，用lcm光径比色槽在波长700nm处测定吸光度，以空白溶液为参比调节仪器零点。校准曲线或直线回归方程：准确吸取(P)=5mg/L标准工作溶液0，1，2，4，6，8mL，分别放入50mL容量瓶中，加水至30mL，同上步骤显色并定容，即得0，0.1，0.2，0.4，0.6，0.8mg／LP标准系列溶液，与待测液同时测定，读取吸光度。然后绘制校准曲线或直线回归方程。４.６结果计算：同上。４.７注意事项：根据分光光度计性能，可选用650-~890nm波长处测定，880—890nm处灵敏度高。5植物全钾的测定一火焰光度法5.1适用范围：适合于植物样品消煮液中钾含量的测定。5.2方法提要：植物样品经消煮或浸提，并经稀释后，待测液中的K可用火焰光度法测定。5.3试剂5.3.1K标准溶液((K)=100mg／L)：0.1907gKCI(分析纯，在105～110~C干燥2h)溶于水，于1L容量瓶中定容，存于塑料瓶中。5.4主要仪器设备5..4.1火焰光度计。6分析步骤：吸取定容后的消煮液5.00～10.00mL(V2：)放入50mL容量瓶中，用水定容(V3)。直接在火焰光度计上测定，读取检流计读数。校准曲线或直线回归方程：准确吸取100mg／LK标准溶液0，1，2.5，5，10，20mL，分别放入50mL容量瓶中，加入定容后的空白消煮液5或10mL(使标准溶液中的离子成分和待测液相近)，加水定容。即得0，2，5，10，20，40mg/LK的标准系列溶液。以浓度最高的标准溶液定火焰光度计检流计的满度(一般只定到90)，然后从稀到浓依次进行测定，记录检流计读数。以检计读数为纵坐标，钾浓度为横坐标绘制校准曲线或求直线回归方程。7结果计算　全(K)，％=KXVX（V3／V2）)Xl0-4／m式中：K——从校准曲线或回归方程求得的测读液中K的浓度，mg／L；V——消煮液定容体积，mL；V2——吸取体积，mLV3——测读液定容体积，mL：m——干样质量，g10-4——将mg／L浓度单位换算为百分含量的换算因数。8注意事项8.1酸度，一般﹤0.25mol/L,水定容。8.2标准液与待测液组成基本相同，加空白消煮液5mL控制。.. 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