丙型肝炎病毒检测方法的研究进展及其临床意义.doc

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1、丙型肝炎病毒检测方法的研究进展及其临床意义摘要丙型肝炎病毒(HCV)为嗜肝性慢性病毒.HCV感染后，患者的起病和临床症状极不典型，以亚临床感染为多见，容易造成漏诊.HCV感染的慢性化发生率明显高于乙型肝炎，较乙型肝炎易早期出现肝硬化、肝癌，死亡率较高•因此HCV的检测对丙型肝炎病毒感染的早期诊断和指导临床治疗有重大的意义月前用于HCV感染诊断的两项主要指标为抗・HCV和HCVRNA,现多采用的第三代检测抗・HCVEIA试剂增加了HCV基因组NS5区表达的蛋白作为抗原，进一步提高了试剂的敏感性，但还存在“窗口期”漏检的问题.HCVRNA检测灵敏度高、特异性强，具有早期诊断的意义，但检出

2、率较低，检测复杂，也可出现假阳性.作为抗・HCV检验的补充试验，HCV核心抗原的检测对处于HCV感染“窗口期”的个体检测有很大价值.炎病毒抗原和抗体[5-6].1989年，Chooetal从大量冇高度传染性的黑猩猩血浆屮提取核酸，经逆转录和分子克隆并进行筛选，获得了部分HCVcDNA序列，并表达重组抗原，建立了特异性抗・HCV血清学的检测方法[7-8],使丙型肝炎的研究成为近年来非常活跃的研究领域，并取得了重大进展•我们就HCV血清学检测方法的研究进展进行了综述.1丙型肝炎病毒抗・HCV的检测随着血液制品在世界范围的流通，HCV感染呈世界性分布，为了控制丙型肝炎病毒的血液传播，世界各

3、国均开展了对献血员抗・HCV的检测.常用的抗-HCV诊断试剂采用间接酶联免疫法(ELISA),其基木原理是以HCV抗原包被酶标板，用辣根过氧化物酶标记的抗人IgG与被检血清中的抗・HCV反应，邻苯二胺(OPD)或3,3?5,5,■四甲基联苯胺(TMB)显色后，根据颜色的深浅进行阴阳性判断•该方法中包被抗原的组成和质量是关键因素.第一代抗・HCVELISA采用的抗原C100-3是HCV非结构基因(NS3/NS4)和人超氧化物歧化酶基因嵌合后表达的融合蛋白，灵敏度低，漏检率较高;第二代抗・HCVELISA在第一代基础上增加了核心区重组蛋白C22和NS3区重组蛋ftC33c,虽然在灵敏度和

4、特异性上有很大改善，但仍不能排除由于重组融合蛋白带来的少数假阳性和极少数的漏检⑼•目前我国多采用第三代抗-HCVELISA试剂，其包被抗原为HCV核心抗原、NS3、NS4和NS5抗原,特异性超过99%,虽然冃前缺乏判断其敏感性的金标准，但对于免疫功能正常的HCVRNA阳性感染者，抗・HCV检出率也高于99%[10].2丙型肝炎病毒核酸RNA的检测HCV感染后一般到抗体转阳有一个较长的窗口期，平均为70d,有的患者窗口期可延长至6-9mo或更长，约"％的患者抗・HCV可持续阴性，而基因组的复制出现得很早，感染后数天即出现病毒血症•己有输血后即有丙型肝炎病毒感染发生的报道，这表明抗・HC

5、V阴性的献血员中冇少数存在丙型肝炎病毒输血传播的可能性[11];另外，美国己报道了1例抗・HCV阴性的器官捐赠者对接受移植者造成丙型肝炎病毒急性感染[12];Willemsetal[13]检测克罗地亚不同地区输血中心的2718份抗・HCV阴性血浆中2.1%为HCVRNA阳性.因此直接检测HCVRNA对于筛查窗口期HCV感染的献血者，降低输血后HCV感染的发病率是必要的.外周血中检出HCVRNA是HCV复制活跃的可靠指标，在感染1-2wk内血清中可检测到HCVRNA,在感染自然恢复前血清中HCVRNA将达到一个高峰，但HCVRAN在达到峰值或重新出现前数天或数周内偶尔也可能检测不到.在

6、大多数向慢性转化的感染者中，HCVRNA含量降低速度逐渐减慢,最后趋于稳定，晚期肝病患者的HCVRNA水平很低，甚至无法测出[14].HCVRNA检测包括定性和定量两种方法，其基本原理就是逆转录聚合酶链反应(RT-PCR):首先经逆转录酶作用，在特异性引物存在下，将HCVRNA逆转录为单链的cDNA,再通过PCR将cDNA扩增.定性PCR的灵敏度高于定量PCR,例如罗氏公司试剂,定性PCR的灵敏度为50klU/L,定量PCR为600klU/L;拜尔公司的定性PCR(转率介导扩增法，TMA)试剂的灵敏度为10klU/L,其定量PCR为615klU/L,因此定性PCR主要用于急慢性丙型肝

7、炎诊断，而定量PCR则用于疗效监测[15].不同定量分析方法中的检测单位与临床标本的HCVRNA实际水平的关系不完全一致，世界卫生组织制定了HCVRNA定量分析单位的国际标准(IU),目前分析方法检测的下限值范围30-615klU/L,上限值范围为5X105-7.7X105klU/L,特异性为98-99%,且不受基因型的影响[10].尽管RT-PCR检测HCVRNA具有早期、敏感和特异等特点，但该方法在技术和设备上要求较高，且费时，检出率较低，主要原因是: