肺结核病人疱疹病毒感染的检测和临床意义

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1、肺结核病人疱疹病毒感染的检测和临床意义：纪静许俊华徐翮飞罗兵【摘要】目的探讨肺结核病人疱疹病毒活动性感染情况。方法采用酶联免疫吸附试验(ELISA)，检测62例肺结核病人和43例正常对照者血清中人巨细胞病毒（HCMV）和单纯疱疹病毒（HSV）特异性IgM抗体以及EB病毒（EBV）衣壳抗原（VCA）IgM抗体。同时，采用PCRSouthern检测肺结核病人和正常人外周血单个核细胞中EBVDNA表达。结果肺结核组血清HCMVIgM和HSVIgM阳性率分别为19.4%和12.9%,正常对照组分别为4.7%和0，肺结核组HCMVIgM和HSVIgM阳性

2、率均高于正常对照组(χ2=4.75、4.31,P<0.01)。肺结核组和正常对照组均未检测到EB病毒VCAIgM，肺结核组EBVDNA阳性率（48.4%）高于正常对照组（4.7%）,差异有显著性(χ2=22.92,P<0.01)。继发性肺结核疱疹病毒感染率（39.6%)高于原发性肺结核（7.1%),差异有显著性(χ2=3.84,P<0.05)。结论部分肺结核病人存在HCMV、HSV以及EBV的活动性感染，人疱疹病毒感染可能影响肺结核病情发生发展。【关键词】单纯疱疹病毒属;结核,肺;酶联免疫吸附测定　　［ABSTRACT］Objecti

3、veToexploretheactiveinfectionofhumanherpesvirusinpatientsancytomegalovirus(HCMV),herpessimplexvirus（HSV）andVCAofEpsteinBarrvirus（EBV）inserumof62TBpatientsand43normalcontrolsononuclearcellsinperipheralbloodofbothgroupsbyPCRSouthern.ResultsThepositiveratesofantiHCMVandantiHSVIg

4、Minthepatientsary(7.1%),thedifferenceeTBpatients,anherpesvirusinfectionmightimpactthepathogenesisofTB.　　［KEYV）IgM、单纯疱疹病毒（HSV）IgM和EB病毒衣壳抗原（VCA）IgM抗体及外周血单个核细胞（PBMC）EBVDNA表达，了解肺结核病人疱疹病毒的感染状态，现报告如下。　　1资料与方法　　1.1一般资料本文62例肺结核病人为2006年7～12月在青岛市胸科医院呼吸科门诊就诊及住院病人,男36例，女26例；年龄15～85岁，平均50岁

5、。诊断均符合世界卫生组织结核病会议修订的诊断标准[1]。其中原发性肺结核14例，继发性肺结核48例。正常对照组43例，来自健康查体人群，年龄和性别与肺结核组相匹配。　　1.2特异性IgM抗体的检测采集正常对照组和肺结核病人外周血，分离血清，采用ELISA法检测HCMVIgM、HSVIgM和VCAIgM抗体，ELISA检测试剂盒购自德国9VATEC公司。HSV抗体检测试剂盒不分型别，参照试剂盒说明书进行操作，对阳性和可疑阳性标本进行重复检验。　　1.3EBVDNA的检测　　1.3.1DNA样本制备　　采集正常对照组和肺结核病人的外周静脉血，EDTA抗

6、凝，分离PBMC，酚氯仿异戊醇法常规提取细胞DNA，预冷无水乙醇沉淀核酸，自然干燥后用TE缓冲液（pH8.0）溶解DNA，4℃保存备用。　　1.3.2PCRSouthern　　参照文献[2]方法，选用EBVBamHⅠgCl21.5mmol/L,dNTP0.2mmol/L,上下游引物各0.5μmol/L,TaqDNA聚合酶1.0U,DNA模板3μL,同时设立阳性对照和阴性对照。阳性对照为EBV阳性的B958细胞,阴性对照为EBV阴性细胞系Ramos细胞。扩增条件为:94℃预变性5min；然后94℃30s,55℃30s,72℃45s,扩增35个循环

7、；最后72℃延伸5min。取扩增产物10μL以20g/L琼脂糖凝胶电泳后转印到尼龙膜上，与地高辛标记的寡核苷酸探针进行杂交反应，经碱性磷酸酶标记的抗地高辛抗体作用后，加酶的发光底物CSPD作用5min，自显影检测杂交信号。　　1.4统计学处理采用四格表χ2检验进行统计学处理。　　2结果　　2.1特异性IgM抗体检测肺结核组HCMVIgM阳性率高于正常对照组,差异有显著性(χ2=4.75，P<0.05)；HSVIgM抗体阳性率也高于正常对照组，差异有显著性（校正χ2=4.31，P<0.05）；但肺结核组与正常对照组VCAIgM抗体均为阴性

8、。见表1。表1肺结核组与正常对照组血清3种疱疹病毒特异性IgM抗体阳性率比较（略