复方补骨脂颗粒长期毒性探究

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复方补骨脂颗粒长期毒性探究［摘要］目的研究复方补骨脂颗粒经口服给药途径的长期毒性。方法以临床成人日用量的60、30、15倍连续灌服3个月，停药2周，分别称量大鼠体重，计算脏器系数，测定血液学和血液生化学指标，并做病理组织学检查。结果复方补骨脂颗粒三组剂量大鼠均未出现中毒症状，大鼠体质量、摄食、血液学、血液生化学和病理组织学等均未见毒理学意义的异常改变。结论复方补骨脂颗粒口服长期服用对大鼠无明显毒性反应，其无毒反应剂量为16g/(kg•d),可推荐临床使用。［关键词］复方补骨脂颗粒；大鼠；长期毒性［中图分类号］R284.1［文献标识码］A［文章编号］1673-7210(2012)12(c)-0025-03复方补骨脂颗粒为治疗骨质疏松的临床经验方，由补骨脂、知母、核桃仁、黄柏、延胡索、怀牛膝、砂仁、慧改仁组成并对其合成工艺、质量标准、药效学等方面进行了较为系统的研究［1-3］o经临床验证，其具有良好的治疗骨质疏松的作用。复方补骨脂颗粒的主要给药方式是口服，为进一步了解复方补骨脂颗粒临床长期用药的安全性，参照《中药、天然药物长期毒性研究技术指导原则》的相关规定［4］,进行长期毒性试验。长期毒性试验可以观察连续反复给药时，实验动物出现的毒性作用、剂量与毒性效应的关系、主要毒 性靶器官、毒性反应的性质和程度、毒性反应是否可逆等，是临床前毒性评价的主要内容，是新药审评重点内容之一，它为临床安全用药的剂量设计提供参考依据，为临床毒副作用的监护及生理生化指标检测提供依据［5］。本实验以大鼠为对象，观察大鼠首先出现的症状和严重程度、毒性反应的靶器官及其恢复和发展情况，确定无毒剂量，为拟定人用安全剂量提供实验依据。1材料与方法1.1药物复方补骨脂颗粒，由本实验组将补骨脂等八种中草药经煎制浓缩调制而成，批号：060215。1.2动物SD大鼠（二级），雌雄各半，体重90〜100g,由河北省实验动物中心提供，许可证号为SCXK（冀）2003-l-003o1.3试剂丙氨酸氨基转换酶（ALT）、天门冬氨酸氨基转换酶（AST）、尿素氮（BUN）、肌酉干（CREA）、碱性磷酸酶（ALP）、总蛋白（TP）、白蛋白（ALB）、总胆固醇（CH0）、总胆红素（BIL）、血糖（GLU）检测试剂分别由南京建成生物工程研究所，首都医科大学首医临床医学科技中心、保定长城临床试剂公司提供。 1.4试验方法[6]将大鼠随机分成4组，每组20只，雌雄各半，每笼饲养5只，分别为正常对照组，复方补骨脂颗粒小剂量组（4g/kg,相当于临床用药的15倍），复方补骨脂颗粒中剂量组（8g/kg,相当于临床用药的30倍，）复方补骨脂颗粒大剂量组（16g/kg,相当于临床用药的60倍）。大剂量组大鼠于每日上午8点、下午4点灌胃给予浓度0.8g/mL的受试物，中剂量组大鼠于每日上午8点、灌胃给予浓度0.8g/mL的受试物，下午4点灌胃给予等容量蒸馄水，小剂量组大鼠于每日上午8点灌胃给予浓度0.4g/mL的受试物，下午4点灌胃给予等容量蒸馆水；对照组大鼠于每日上午8点灌胃给予等容量蒸馆水，容量均为1mL/100g体重，每周定时给药7d,并称重1次，根据体重变化调整给药量，连续3个月。末次给药后，动物禁食12h（不禁水），各组活杀10只大鼠，剩余10只大鼠作恢复期观察。试验周期为3个月；恢复期为2周。1.5检测指标从购入日到恢复期结束，每天2次观察动物的外观体征、行为活动、二便情况；给药期间以及恢复期每周称1次体质量，测1次进水进食量；给药结束和恢复期结束各检测1次血液学及血液生化学，各组分别取一半动物的主要脏器进行肉眼观察、病理检查并计算脏器系数[7-8]o1.6统计学方法采用SPSS14.0进行统计学分析，计量资料数据以均数土标准差(x±s)表示，采用方差分析，两两比较采用LSD-t检验。计数资料以率表示，采用x2检验。以P0.05)；复方补骨脂 颗粒(4、8、16g/kg)连续12周灌胃给药对大鼠体重均无明显影响(P>0.05)o见表1、2。1.3对大鼠血液学指标的影响结果显示，各组大鼠外周血红细胞数、血红蛋白、血小板数、白细胞数及分类、凝血时间差异均无统计学意义(P>0.05),说明三个剂量组对大鼠的各项血液学指标均无明显影响。见表3。2.5对大鼠主要脏器系数的影响结果显示，各组大鼠脏器系数差异均无统计学意义(P>0.05)o表明，复方补骨脂颗粒三个剂量组对大鼠的各主要脏器系数均无明显影响。见表5。2.6病理组织学检查随机抽取各组1/2动物对其重要脏器进行病理组织学检查，对心、肝、脾、肾、肺、大脑胃、胸腺、肾上腺、甲状腺、卵巢、子宫、睾丸、前列腺等的病理组织学检查，结果各给药组和对照组均未发现与用药有关的病理组织学的改变。3讨论复方补骨脂颗粒是由补骨脂、知母、核桃仁、黄柏、延胡索、怀牛膝、砂仁、蕙该仁八味中药组成的复方制剂，其中补骨脂是君药，含有多种活性成分，香豆素类是其主要活性成分，其中的补骨脂素亦有毒性方面的报道[9-10]o对复方补骨脂颗粒进行了3个月的大鼠长期毒性试验，通过该受 试药对大鼠毒理实验性的研究，为其在临床长期使用的安全性，拟定临床试验剂量及观察指标提供参考。实验研究主要从一般检查(摄食、体质量、活动、二便等)、血液学检查、血液生化学检查、主要脏器质量及计算脏器系数、主要脏器病理形态5个方面评价复方补骨脂颗粒，设计高中低三个给药组，用药量分别达到临床用量的60、30、15倍，整个实验周期无一动物死亡。在所检测的各项指标中：①各组动物摄食正常，未出现与给药浓度相对应的差异变化趋势，停药后，各组动物摄食量未见延迟性变化。②对动物体质量无影响，受试物各组与正常对照组体质量增长相近。③血液学检查表明高、中、低剂量组间无剂量依赖关系。④血液生化学检查表明，低、中、高剂量组均在正常参考值范围之内，且无剂量性依赖关系，可以认为该受试物给药后对各项血液生化指标没有影响。⑤病理组织学检查表明，受试物各组脏器质量及脏器系数均在正常范围内波动。综上所述，表明该药物无明显毒性反应，其无毒反应剂量为16g/(kg・d),可推荐临床使用。［参考文献］［1］张茹，陈军丽•正交试验优选复方补骨脂颗粒的提取工艺［J］.中国医院药学杂志，2009,29(3)：252-253.［2］张茹•复方补骨脂颗粒质量标准研究［J］.现代中西医结合杂志，2010,19(25)：3226-3228.［3］张茹，秦莉伟，陈军丽，等.复方补骨脂颗粒对维 甲酸致骨质疏松症大鼠的影响研究［J］.河北医药杂志，2011,11(33)：1615-1616.［4］国家药品监督管理局•中药、天然药物长期毒性研究技术指导原则［S1GPT3-1.2005.［5］许迪，孔利佳，杜佐华，等.大鼠长期毒性试验质量控制探讨［J］.中国比较医学杂志,2010,20(1)：61-63,69.［6］袁伯俊，廖明阳，李波.药物毒理学实验方法与技术［M］.北京：化学工业出版社，2007：51.［7］徐叔云，卞如濂，陈修.药理实验方法学［M］.北京:人民卫生出版社，1993：69.［8］范玉明，张舒•毒理学安全性评价标准操作规程指南［M］.成都：电子科技大学出版社，2009：114.［9］张红莲，王雅楠，王建华.补骨脂的化学成分及药理活性研究概况［J］.天然产物研究与开发，2010,(22)：909-913,918.[10]吴疆，魏巍，袁永兵•补骨脂的化学成分和药理作用研究进展[J].药物评价研究，2011,34(3)：217-219.(收稿日期:2012-08-24本文编辑:卫轲)