高山杜鹃ISSR—PCR反应体系建立-论文.pdf

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1、安徽农业科学，JournalofAnhuiA．Sci．2013，41(27)：10977—10979，11040责任编辑石金友责任校对况玲玲高山杜鹃ISSR—PCR反应体系建立石绍高，孙正海，李世峰，解玮佳。，刘邦4，王永路(1．云南省昭通市永善县务基林业站，云南昭通657302；2．西南林业大学园林学院，云南昆明650224；3．云南省农业科学院花卉研究所，云南昆明650205；4．普洱市景东县住房和城乡建设局，云南普洱676200)摘要[目的]建立高山杜鹃的ISSR—PCR反应体系。[方法]运用

2、正交试验分析模板DNA、TaqDNA聚合酶、Primer、Mg“和dNTPs5个因子对杜鹃ISSR-PcR反应影响，建立高山杜鹃ISSR．PCR反应体系。[结果]杜鹃ISSR—PCR25反应体系中5个因子较适水平为：DNA模板浓度为1．6nr／，TaqDNA聚合酶浓度为0．040U／l，Primer浓度为0．64mmo]／L，dNTPs浓度为0．68mmol／L，Mg“浓度为2．O8mmol／L。[结论]研究结果为利用ISSR分子标记技术研究杜鹃提供了理论支持。关键词高山杜鹃IRhododendro

3、nlapponicum(L．)waIl1．]；ISSR—PCR反应；体系建立中图分类号s685．21文献标识码A文章编号0517—6611(2013)27—10977—03Establishmentof珏R—PCRReactionSystemforRhododendrontapponicumsllⅡShao,gaoetai(WujiForestryStationofYongshanCounty．Zhaotong。Yunnan657302)AImtraet10bjeefiveIT0establishI

4、SSR．PCRreactionsystemforRhododendronlapponicum．『Method1Efectsoffivefactors(DNAtemplate，TagDNA，Primer。Mg“anddNTPs)onISSR．PCRreactionofRhododendronlapponicumwereanalyzedbyorthogonaldesignforestablishingandoptimizingISSR-PCRreactionsystem．1Result1Asaresul

5、t．theoptimalIssR—PcRreactionsystem(25)mixturecontalned4o．00ngDNAtemplate，1．0UTagDNA，0．64retool／Lprimer，2．08mmo]／LMg“and0．68mmol／LdNTPs．{ConclusionITheorysustainingforresearchingRhododendronbyIssRmolecularmarkerwereafordedfromthisexperiment．KeywordsRhod

6、odendronlapponicum(L．)W枷．：ISSR—PCRreaction；Systemestablishment杜鹃是世界上最著名的花卉之一，被列入中国十大名SR标记对高山杜鹃进行后续研究奠定基础。花，誉为“花中西施”。杜鹃属(Rhododendron)植物种类繁1材料与方法多，全世界约有1000余种。中国西南是杜鹃的主要分布中1．1材料研究对象为杜鹃叶片，由云南省农科院花卉所心，仅云、贵、川3省就占全国种类的65％以上。高山杜鹃室提供。试验试剂均为分析纯，购自北京鼎国昌盛生物技术[Rh

7、ododendronlapponicum(L．)Wah1．]因其花冠硕大、颜色有限责任公司。丰富、花姿优美、株型漂亮而且四季常绿，更是杜鹃家族中的1．2方法“精品”，具有极高的观赏价值和经济价值。目前，高山杜鹃1．2．1试验材料预处理。取杜鹃幼嫩叶片，用浓度70％酒在耐旱、逆境胁迫[6-1o]、栽培技术⋯-12]、根际微生物”]、精擦洗杜鹃叶片表面，于一70℃冰箱保存备用。组培’、种子萌发、分类。、光合生理。和观赏等1．2．2杜鹃基因组。DNA提取。采用改良CTAB法提取杜鹃方面研究较多，在栽培和组

8、培2方面研究进展显著，但关于基因组DNA。1．2．3杜鹃ISSR．PCR反应引物筛选。从加拿大哥伦比亚高山杜鹃的分子生物学研究鲜有报道。大学公布的6o个ISSR引物中随机选择9个引物837、840、ISSR(Inter-simpleSequenceRepeat)由ZietkiewiCZ等841、843、846、849、856、857和858(具体序列见表1)进行目标于1994年创建，因其具有分布广、多态性高、DNA用量少且引物筛选。初反应体系中raq酶浓度0．040U