桔梗ISSR反应体系的建立和优化-论文.pdf

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1、时珍国医国药2014年第25卷第6期LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH2014VOL．25NO．6桔梗ISSR反应体系的建立和优化于营，郭靖，王志清，邵财，张庆田(中国农业科学院特产研究所，吉林长春130112)摘要：目的建立并优化桔梗ISSR—PCR反应体系和扩增程序。方法采用正交试验和单因子试验，对ISSR反应体系主要因子(dNTPs、Taq酶、引物、Mg“、模板)进行筛选。之后通过单因子试验，进行引物退火温度、循环次数的筛选。结果桔梗ISSR—PCR的最佳反应体系(201)为：

2、dNTPs0．25mmol／L、Taq酶1．0u、引物0．301．zmol／L、Mg“1．50mmo／／L、模板DNA10ng。利用此反应体系从54条引物中筛选出12条扩增稳定、多态性丰富的ISSR引物，确定了引物UBC853[序列为(TC)8RC]的最佳退火温度为55℃和循环次数为45次。结论建立的桔梗ISSR—PCR反应体系，经过白、紫花桔梗共20份样品检验，证明该体系具有稳定性和可靠性，可用于桔梗遗传多样性研究。关键词：桔梗；ISSR—PCR；正交设计；体系优化；引物筛选D0I标识：doi：10．3969／j．issn．10

3、08-0805．2014．06．045中图分类号：$567文献标识码：A文章编号：1008-0805(2014)06．1396-03EstablishmentandoptimizationofISSR—PCRreactionsystemforPlatycodongrandiflo-rusYUYing，GUOJing，WANGZhi—qing，SHAOCai，ZHANGQing—tian(InstituteofSpecial阢fdEconomicAnimalandPlantScience，CAAS，JilinChangchun130

4、112，China)Abstract：0bjectiveSomestudiesweredonetoestablishandoptimizetheISSR—PCRreactionsystemforplatycodonsimuhane—ously．MethodsThemaininfluencefactorsofISSRreactionsystem(dNTP，TaqDNApolymerase，primers，Mg“andthetern—plateDNA)werestudiedutilizingtheorthogonalandsingle

5、factortest．Andthen，theannealingtemperatureandcycletimeswerestudiedutilizingthesinglefactortest．ResultsTheoptimalPCRreactionsystemcontained0．25mmol／LdNTPs，1．0UTaqDNApolymerase，0．30p,mol／Lprimer，1．50mmoL／LMg2and20ngtemplateDNAintotal20reactionsolution．Onthisbasis，12，pri

6、merswhichhavestableamplificationandrichpolymorphismwerescreenedfrom54ISSRprimers．Meanwhile，theoptimalan—nealingtemperatureandcycletimesabouttheISSR—PCRreactionwere57℃and45．ConclusionAccordingtotheresuhsoftheselected20P．grandiflorussamples，theestablishedISSRreactionsys

7、temwhichcanbeusedforthecharacteristicsofthegeneticdiversityresearcharestableandcredible．Keywords：Platycodongrandiflorum；ISSR—PCR；Orthogonaldesign；Optimizationofsystem；Primersscreening桔梗Platycodongrandiflorum(Jacq．)A．DC系桔梗科(Cam一1材料panulaceae)桔梗属(Platycodon)多年生草本植物，别名铃铛

8、花、灯试验所用的20份桔梗采自农业部长白山野生生物资源观测笼棵、包袱花等J，是我国常用中药材。以干燥根人药，其味苦，站，白花桔梗和紫花桔梗幼叶各10份，经中国农业科学院特产研辛；性平。具有开宣肺气，祛痰排脓之功效J。用于治疗外感咳究所郭靖副研究员鉴