番茄颈腐根腐病病原菌鉴定与抗病种质材料的筛选

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园艺学报，2016，43(4)：781–788.ActaHorticulturaeSinicadoi：10.16420/j.issn.0513-353x.2015-0891；http：//www.ahs.ac.cn781番茄颈腐根腐病病原菌鉴定与抗病种质材料的筛选1,*1,*21311程琳，张生，李艳青，陈福东，程斐，张晓艳，董甜，1,**国家进1（山东省设施蔬菜分子育种省级重点实验室，潍坊市蔬菜分子育种企业重点实验室，山东寿光蔬菜种业集团有限公23司，山东省寿光蔬菜产业集团有限公司，山东寿光262700；潍坊科技学院，山东寿光262700；青岛农业大学，山东青岛266000）摘要：2014年在山东寿光农户种植番茄的日光温室内采集典型颈腐根腐病症状的发病植株进行病原分离、纯化，结合形态学观察及rDNA-ITS序列分析，确定病原菌为尖孢镰刀菌番茄颈腐根腐病专化型（Fusariumoxysporumf.sp.radicis-lycopersici）。利用源自秘鲁番茄颈腐根腐病抗性基因Frl的共显性标记C2-25，对田间未表现典型颈腐根腐病症状的25份种质材料进行鉴定，鉴定出19份纯合抗病材料，2份杂合抗病材料，4份纯合感病材料，此结果与人工接种病原菌鉴定方法相一致。关键词：番茄；番茄颈腐根腐病；病原菌鉴定；Frl；分子标记中图分类号：S641.2文献标志码：A文章编号：0513-353X（2016）04-0781-08PathogenIdentificationofFusariumCrownRootRotandScreeningforResistantSourcesinTomato1,*1,*2131CHENGLin，ZHANGSheng，LIYan-qing，CHENFu-dong，CHENGFei，ZHANGXiao-yan，11,**DONGTian，andGUOJia-jin1（ShandongProvincialKeyLaboratoryofProtectedVegetableMolecularBreeding，WeifangEnterpriseKeyLaboratoryofVegetableMolecularBreeding，ShandongShouguangVegetableSeedIndustryGroupCo.Ltd，ShandongShouguang2VegetableIndustryGroupCo.Ltd，Shouguang，Shandong262700，China；WeifangUniversityofScience&Technology，3Shouguang，Shandong262700，China；QingdaoAgriculturalUniversity，Qingdao，Shandong266000，China）Abstract：ThetypicalFusariumcrownrootrot（FCRR）infectedtomatoplantswerecollectedingrowers’greenhouseinShouguang，ShandongProvincein2014.ThepathogenwasisolatedandcatagariedaccordingtothemorphologyandthesequenceofinternaltranscribedspacerregionoftheribosomalDNA（ITS）.TheresultshowedthatthepathogenofthediseasewasidentifiedasFusariumoxysporumf.sp.radicis-lycopersici.Thecleavedamplifiedpolymorphicsequence（CAPS）markerC2-25forFCRRresistancegeneFrl，whichwasderivedfromSolanumperuvianum，weretestedin25germplasmswithout收稿日期：2016–02–19；修回日期：2016–04–07基金项目：山东省农业良种工程泰山学者种业计划专家项目[鲁科字（2014）126号]；山东省良种工程农业生物资源创新利用研究项目（PTBR2013）；潍坊科技学院博士基金项目（W13K009）*并列第一作者**通信作者Authorforcorrespondence（E-mail：guojiajin@126.com） ChengLin，ZhangSheng，LiYan-qing，ChenFu-dong，ChengFei，ZhangXiao-yan，DongTian，GuoJia-Jin.PathogenidentificationofFusariumcrownrootrotandscreeningforresistantsourcesintomato.782ActaHorticulturaeSinica，2016，43(4)：781–788.typicalFCRRsymptom，inwhich19homozygous，2heterozygousresistantsand4homozygoussusceptibleplantswerefound.Moreover，molecularmarkertestshowedgoodagreementwiththeartificialpathogeninoculationresults.Keywords：tomato；Fusariumcrownandrootrot；pathogenidentification；Frl；molecularmarker番茄颈腐根腐病（Fusariumcrownandrootrot，FCRR）是番茄（Solanumlycopersicum）重要的土传病害，最早于1974年在日本发现（Sato&Arak，1974），之后在美国等许多国家陆续被发现（Scott&Jones，2000；Scott，2008）。番茄颈腐根腐病病原菌经观察、比较、鉴定，确定为尖孢镰刀菌番茄颈腐根腐病专化型Fusariumoxysporumf.sp.radicis-lycopersici（Yamamotoetal.，1974；Jarvis&Shoemaker，1978）。番茄颈腐根腐病主要症状表现为在土壤与植株茎基部接处部位出现明显的深褐色病斑，幼苗期植株（3~5片叶）从病斑处折倒而萎蔫致死。5叶期至开花结果期发病，则出现茎基部缢缩且呈深褐色，植株直立而萎蔫致死的症状（Menziesetal.，1990；耿丽华等，2012）。在中国江苏、山东、辽宁、宁夏等地多年连作的塑料大棚和日光温室中均有番茄颈腐根腐病发生的报道。山东省塑料大棚和日光温室番茄主产区包括烟台海阳市、潍坊寿光市、东营广饶县、德州齐河县与临邑县、临沂费县与苍山县等，番茄颈腐根腐病发生普遍，其中寿光日光温室番茄发病率达80%以上，致死率达30%以上，造成严重减产，已成为山东省继线虫、黄化曲叶病毒等毁灭性病害爆发之后的另一重要普遍性番茄病害。对颈腐根腐病具有显著抗性的种质材料中具有来源于秘鲁番茄的单基因Frl（Vakalounakis，1988；Laterrot&Moretti，1991）。Frl位于9号染色体且与Tm-2、ah（导致苗期子叶胚轴花色素减少基因）紧密连锁（Laterrot&Moretti，1995；Vakalounakisetal.，1997；Ashrafietal.，2009）。对Frl基因分子标记的研究已有一定进展，一系列RAPD、CAPS标记被报道（Fazioetal.，1999；Tanyolac&Akkale，2010；Truongetal.，2011），其中Staniaszek等（2014）根据与Frl紧密连锁的保守序列位点C2-At2g38025设计的CAPS标记C2-25最为有效。本研究中针对山东寿光地区番茄颈腐根腐病，采用形态学方法和rDNA-ITS序列分析方法对病原菌进行鉴定，同时利用抗性基因Frl的CAPS标记C2-25对25份从荷兰引进的番茄种质材料进行筛选，为培育优良的抗番茄颈腐根腐病品种提供材料。1材料与方法1.1材料试验于2014年7月至2015年1月在山东省蔬菜工程技术研究中心基地日光温室内进行。供试番茄材料共25份，包括16份绿茎番茄材料和9份紫茎番茄材料。所有材料于2014年7月20日播种，8月20日定植。每份材料种植25株，采用常规田间管理。2014年9月于山东省寿光市稻田镇西刘营村农户日光温室内采集典型的番茄颈腐根腐病发病植株，按常规方法保存。1.2病原菌的分离纯化及形态特征观察采集的发病植株，用PDA固体培养基在25℃条件下进行病原菌培养，挑取单孢纯化。将纯化的病原菌接种到PDA平板上，置于25℃生化培养箱中黑暗培养7d，于生物显微镜下观察其菌落 程琳，张生，李艳青，陈福东，程斐，张晓艳，董甜，国家进.番茄颈腐根腐病病原菌鉴定与抗病种质材料的筛选.园艺学报，2016，43(4)：781–788.783形态、分生孢子和厚垣孢子的形态特征。1.3病原菌rDNA-ITS的扩增及序列分析-1在马铃薯葡萄糖液体培养基中接种病原菌，置于摇床中以25℃、120r·min的条件振荡培养3~4d。过滤收集菌丝体，经冷冻干燥处理后，利用TianGenDNA提取试剂盒进行DNA提取。利用真菌核糖体基因转录间隔区（ITS）通用引物ITS1（5′-TCCGTAGGTGAACCTGCGG-3′）和ITS4（5′-TCCTCCGCTTATTGATATGC-3′）对病原菌的rDNA-ITS区域进行PCR扩增。扩增条件为：94℃预变性5min；94℃变性30s，57℃退火30s，72℃延伸1min，30个循环；72℃延伸10min。PCR产物经琼脂糖凝胶电泳检测、割胶回收、TA连接、转化，送由北京英骏生物技术分公司进行测序。所得序列在GenBank数据库中进行比对分析，并利用MEGA6.0软件建立系统进化树。1.4病原菌致病性测定-1将病原菌接种到马铃薯葡萄糖液体培养基中，置于摇床中以25℃、120r·min振荡培养3d，7-1过滤除去菌体，配制浓度为10个·mL的孢子悬浮液。番茄抗颈腐根腐病品种、番茄感颈腐根腐病品种在灭菌基质中长至1片真叶时，用清水将根系清洗干净，放在孢子悬液中浸根接种处理10min，然后移栽至灭菌基质中，对照组用清水浸根10min，置于18℃光照培养箱中培养。接种处理两周后，观察、记录材料的发病情况。1.5抗病材料的分子标记检测用CTAB法提取25份番茄材料的基因组DNA，利用抗性基因Frl的CAPS标记C2-25（F：5′-ATGGGCGCTGCATGTTTCGTG-3′，R：5′-ACACCTTTGTTGAAAGCCATCCC-3′）对其进行PCR扩增。扩增条件为：94℃预变性5min；94℃变性30s，50℃退火30s，72℃延伸1min，35个循环；72℃延伸10min。PCR产物经限制性内切酶ApoⅠ于50℃下酶切处理1h后，用琼脂糖凝胶电泳检测，1000bp条带表示感病材料，700bp条带表示抗病材料。Ty1和Ty3检测引物分别用deCastro等（2007）和Ji等（2007）设计的Ty1和Ty3引物；Ty2检测引物用Yang等（2014）设计的Ty2引物；Sw5-2检测引物用Dianese等（2010）设计的Sw5-2；其他抗病基因Tm、C5、F2和Ve检测数据由荷兰AXIA公司提供。2结果与分析2.1病原菌鉴定2.1.1病原菌的形态特征观察通过分离培养获得番茄颈腐根腐病病菌。根据关于番茄颈腐根腐病尖孢镰刀菌番茄颈腐根腐病专化型的形态描述，确定分离培养的病原菌为尖孢镰刀菌番茄颈腐根腐病专化型（耿丽华等，2012）。如图1所示，菌落平铺，菌落出现轮纹，产生紫色色素（图1，A）；大型分生孢子镰刀形，两头稍尖，小型分生孢子圆形、纺锤形或椭圆形（图1，B）；厚垣孢子顶生或串生，球形略透明（图1，C）；分生孢子梗单生于菌丝一侧（图1，D）。2.1.2ITS序列分析用ITS通用引物对病原菌进行PCR扩增，经琼脂糖凝胶电泳检测，得到大小约500bp的片段，回收该片段并测序，得到该病原菌的ITS序列505bp，进行GenBank注册，收录号为KU170676。 ChengLin，ZhangSheng，LiYan-qing，ChenFu-dong，ChengFei，ZhangXiao-yan，DongTian，GuoJia-Jin.PathogenidentificationofFusariumcrownrootrotandscreeningforresistantsourcesintomato.784ActaHorticulturaeSinica，2016，43(4)：781–788.将该序列在GenBank数据库中进行比对分析，并利用MEGA6.0建立系统进化树，发现该病原菌的ITS序列与HQ603748等尖孢镰刀菌的序列同源性达99%（图2），结果表明该病原菌属于尖孢镰刀菌。图1尖孢镰刀菌番茄颈腐根腐病专化型形态A：菌落；B：大孢子和小孢子；C：厚垣孢子；D：分生孢子梗。Fig.1TheshapeofFusariumoxysporumf.sp.radicis-lycopersiciA：Hypha；B：Macroconidiaandmicroconidia；C：Chlamydospore；D：Conidiophore.2.1.3致病性测定对番茄抗病品种、感病品种进行人工接种颈腐根腐病病原菌，抗病品种无显著变化，感病品种茎基部缢缩，出现褐色病斑，从病斑处折倒（图3）。图2菌株SG11与GenBank中同源性较高的镰刀菌ITS图3番茄幼苗人工接种番茄颈腐根腐病病原菌的发病情况序列比对分析进化树状图Fig.3TheincidenceoftomatoseedlingbyartificialinoculationFig.2HomologytreeusingITSsequencesofSG11strainandtomatoFusariumoxysporumf.sp.radicis-lycopersiciotherstrainsfromGenBank 程琳，张生，李艳青，陈福东，程斐，张晓艳，董甜，国家进.番茄颈腐根腐病病原菌鉴定与抗病种质材料的筛选.园艺学报，2016，43(4)：781–788.7852.2抗病种质材料筛选2.2.1抗病种质材料的分子标记检测用抗性基因Frl的分子标记C2-25对25份番茄种质材料进行PCR扩增，PCR产物经ApoⅠ酶切后用琼脂糖凝胶电泳检测。结果显示，HC044等19份种质材料扩增出700bp条带，RD15-885等4份种质材料扩增出1000bp条带，RD15-402等2份杂合材料扩增出1000bp和700bp条带（图4）。根据Staniaszek等（2014）的结论，对应的19份种质材料含有纯合的抗性基因Frl，包括HC044MSS、HC046MSS、HC397MSS、RD15-790、RD15-820-1、RD15-820-2、RD15-910、RD15-906、607-3、607-2、RD15-634、RD15-633、RD15-637、HC047MSS、RD15-464、RD15-462、RD15-463、RD15-391和607-4；4份不含抗性基因Frl，包括RD15-885、543-2、RD15-499和RD15-499-1；2份含有杂合的抗性基因Frl，包括543-1和RD15-402。图4不同番茄材料的C2-25PCR扩增图1~25表示的材料见表1。Fig.4PCRamplificationprofileobtainedwiththeC2-25primerpairindifferenttomatomaterialsThematerialsof1–25werelistedinTable1.2.2.2抗病种质材料人工接种鉴定用人工接种鉴定病原菌的方法对25份番茄种质材料进行抗病性鉴定，结果表明HC044等19份种质材料表现抗病；RD15-885等4份种质材料表现感病，茎基部出现褐色病斑，幼苗从病斑处倒折；RD15-402等2份杂合种质材料表现为抗病。人工病原菌接种鉴定结果与分子标记检测结果高度吻合，吻合率达100%。2.2.325份种质材料农艺性状调查25份种质材料中，19份纯合抗番茄颈腐根腐病番茄种质材料中，15份表现为绿茎，4份表现为紫茎；2份杂合材料均表现为紫茎；4份纯合感病种质材料中，1份表现为绿茎，3份表现为紫茎（表1，表2）。19份纯合抗番茄颈腐根腐病番茄种质材料中，果实大小、颜色、硬度、果形、熟性等综合农艺性状较好，其中单果质量在200~250g之间的种质材料有2份，在120~160g之间的有5份，在30~50g之间的有5份，小于30g的有7份；果实颜色涵盖黄色、橙色、粉色、深粉色、红色（表1）；含有Ty2抗性种质材料7份，含有Ty1/3种质材料5份，含有Sw-5抗性资源的种质材料9份（表2）。 ChengLin，ZhangSheng，LiYan-qing，ChenFu-dong，ChengFei，ZhangXiao-yan，DongTian，GuoJia-Jin.PathogenidentificationofFusariumcrownrootrotandscreeningforresistantsourcesintomato.786ActaHorticulturaeSinica，2016，43(4)：781–788.表1用于共显性分子标记C2-25筛选的25份番茄材料的性状Table1Charactersof25tomatomaterialsusedforanalysiswithco-dominantmarkerC2-25序号材料名称生长习性茎色果色单果质量/g果形离层果肩硬度熟性NumberNameGrowhabitStemcolorFruitcolorFruitweightFruitshapeAbscisslayerFruitshoulderFruitfirmnessMatury1HC044MSS无限紫红230扁圆无无硬中熟UnlimitedPurpleRedFlatroundNoNoHardMiddle2HC046MSS无限紫红200圆无无硬中熟UnlimitedPurpleRedRoundNoNoHardMiddle3HC397MSS无限绿粉红25长椭圆有无硬早熟UnlimitedGreenPinkLongromaYesNoHardEarly4RD15-790无限绿粉红25长椭圆有无硬早熟UnlimitedGreenPinkLongromaYesNoHardEarly5RD15-820-1无限绿橙40椭圆有无硬早熟UnlimitedGreenOrangeRomaYesNoHardEarly6RD15-820-2无限绿橙40椭圆有无硬早熟UnlimitedGreenOrangeRomaYesNoHardEarly7RD15-910有限绿黄40椭圆有无硬早熟LimitedGreenYellowRomaYesNoHardEarly8RD15-906有限绿深粉30椭圆有无硬中熟LimitedGreenDeeppinkRomaYesNoHardMiddle9RD15-885有限绿红20圆有无硬早熟LimitedGreenRedRoundYesNoHardEarly10607-3无限绿粉红20高圆有无硬早熟UnlimitedGreenPinkHighroundYesNoHardEarly11607-2无限绿粉红20高圆有无硬早熟UnlimitedGreenPinkHighroundYesNoHardEarly12RD15-634无限绿深粉20圆有无硬早熟UnlimitedGreenDeeppinkRoundYesNoHardEarly13RD15-633无限绿深粉20圆有无硬早熟UnlimitedGreenDeeppinkRoundYesNoHardEarly14RD15-637无限绿深粉30高有无硬早熟UnlimitedGreenDeeppinkHighroundYesNoHardEarly15543-1无限紫粉红20椭圆有无硬早熟UnlimitedPurplePinkRomaYesNoHardEarly16543-2无限紫粉红20椭圆有无硬早熟UnlimitedPurplePinkRomaYesNoHardEarly17HC047MSS无限紫红160圆有无硬中熟UnlimitedPurpleRedRoundYesNoHardMiddle18RD15-464有限绿红120椭圆有无硬中熟LimitedGreenRedRomaYesNoHardMiddle19RD15-462有限绿红120椭圆有无硬中熟LimitedGreenRedRomaYesNoHardMiddle20RD15-463有限绿红120椭圆有无硬中熟LimitedGreenRedRomaYesNoHardMiddle21RD15-391无限紫黄120圆有无硬中熟UnlimitedPurpleYellowRoundYesNoHardMiddle22RD15-402无限紫巧克力色120椭圆有无硬中熟UnlimitedPurpleChocolateRomaYesNoHardMiddle23RD15-499无限紫红15椭圆有无硬早熟UnlimitedPurpleRedRomaYesNoHardEarly24RD15-499-1无限紫红15椭圆有无硬早熟UnlimitedPurpleRedRomaYesNoHardEarly25607-4无限绿粉红20高圆有无硬早熟UnlimitedGreenPinkHighroundYesNoHardEarly 程琳，张生，李艳青，陈福东，程斐，张晓艳，董甜，国家进.番茄颈腐根腐病病原菌鉴定与抗病种质材料的筛选.园艺学报，2016，43(4)：781–788.787表2用于共显性分子标记C2-25筛选的25份番茄材料的抗病性Table2Resistanceof25tomatomaterialsusedforanalysiswithco-dominantmarkerC2-25材料名称抗病基因Resistancegene序号NameTYFrlSw-5其他Others1HC044MSSTy1/3+–Tm，C5，F2，Ve2HC046MSSTy1/3+–Tm，C5，F2，Ve3HC397MSSTy2++4RD15-790Ty2+–5RD15-820-1–+±6RD15-820-2–+±7RD15-910Ty2+–8RD15-906–+±9RD15-885Ty2–+10607-3–+–11607-2–++12RD15-634Ty2+–13RD15-633Ty2+–14RD15-637Ty2+–15543-1–±–16543-2––+17HC047MSSTy1/3+–18RD15-464Ty2+–19RD15-462Ty2+–20RD15-463Ty2+–21RD15-391Ty1/3+–Tm，C5，F2，Ve22RD15-402Ty1/3±–23RD15-499Ty2–+24RD15-499-1Ty2–+25607-4–+–注：+：含纯合抗性基因；–：不含抗性基因；±：含杂合抗性基因。Note：+：Homozygousresistancegene；–：Noresistancegene；±：Heterozygousresistancegene.3讨论本试验中病原菌材料取自山东寿光农户日光温室发病植株，对其进行形态鉴定和rDNA-ITS序列分析，结果显示该病原菌为尖孢镰刀菌，与耿丽华等（2012）描述的尖孢镰刀菌番茄颈腐根腐病专化型相一致。利用Frl的CAPS标记C2-25检测出的19份含有纯合抗病基因Frl和2份含有杂合抗病基因Frl的种质材料经过人工接种验证均表现抗病，分子检测结果与人工接种鉴定结果吻合率达100%。因此，抗病基因Frl是今后番茄抗茎腐根腐病育种的重要基因，利用标记C2-25对抗病种质材料进行筛选是一条有效而便捷的辅助育种方法。抗病基因Frl的杂合基因型和纯合基因型均表现抗病，显示Frl为显性基因。在19份纯合抗番茄颈腐根腐病番茄种质材料中，15份表现为绿茎，4份表现为紫茎；2份杂合均表现为紫茎；4份纯合感病种质材料中，1份表现为绿茎，3份表现为紫茎。本试验研究结果与前人发表的Frl基因与ah（导致苗期子叶胚轴花色素减少基因）紧密连锁的结论相一致（Majid&Foolad，2012），但是在育种实践中依靠胚轴颜色判断番茄材料是否抗颈腐根腐病将会存在较大误差。本研究中筛选得到的含Frl基因的珍贵育种材料，兼有抗黄化曲叶病毒和斑萎病毒基因，且综合农艺性状较为优良，因此可有效用于今后的番茄育种中。但从育种需求来看，获得的这些含有Frl的番茄材料类型还不够丰富，例如获得的材料单果质量均低于230g，没有超过250g的大果类型的材料，而粉红色果实的番茄材料单果质量均在20~30g。因此，在随后的育种工作中需要利用分子 ChengLin，ZhangSheng，LiYan-qing，ChenFu-dong，ChengFei，ZhangXiao-yan，DongTian，GuoJia-Jin.PathogenidentificationofFusariumcrownrootrotandscreeningforresistantsourcesintomato.788ActaHorticulturaeSinica，2016，43(4)：781–788.标记辅助育种手段，将Frl导入更多的骨干亲本材料中，以创造更多的抗番茄颈腐根腐病的育种材料。ReferencesAshrafiH，KinkadeM，FooladMR.2009.AnewgeneticlinkagemapoftomatobasedonaSolanumlycopersicun×S.pimpinellifoliumRILpopulationdisplayinglocationsofcandidatepathogenresponsegenes.NRCResearchPress，52：935–956.deCastroAP，BlancaJM，DiezMJ，VinalsFN.2007.IdentificationofaCAPSmarkertightlylinkedtothetomatoyellowleafcurldiseaseresistancegeneTy-1intomato.EuropeanJournalofPlantPathology，117：347–356.DianeseEC，deFonsecaMEN，GoldbachR，KormelinkR，Inoue-NagataAK，ResendeRO，BoiteuxLS.2010.Developmentofalocus-specific，co-dominantSCARmarkerforassisted-selectionoftheSw-5（Tospovirusresistance）geneclusterinawiderangeoftomatoaccessions.MolecularBreeding，25(1)：133–142.FazioG，StevensMR，ScottJW.1999.IdentificationofRAPDmarkerslinkedtoFusariumcrownandrootrotresistance（Frl）intomato.Euphytica，105：205–210.GengLi-hua，LiChang-bao，ChiSheng-qi，WangLi-jun，ChaiMin.2012.IdentificationofthepathogencausingFusariumcrownandrootrotoftomatoanditsgrowthaffectingfactors.ActaPhytopathologicaSinica，42(5)：449–455.(inChinese)耿丽华，李常保，迟胜起，王丽君，柴敏.2012.番茄颈腐根腐病病原鉴定及不同条件对其生长的影响.植物病理学报，42(5)：449–455.JarvisWR，ShoemakerRA.1978.TaxonomicstatusofFusariumoxysporumcausingfootandrootrotoftomato.Phytopathology，68：1679–1680.JiY，SchusterDJ，ScottJW.2007.Ty-3，abegomovirusresistancelocusneartheTomatoyellowleafcurlvirusresistancelocusTy-1onchromosome6oftomato.MolecularBreeding，20：271–284.LaterrotH，MorettiA.1991.AllelismofvariousFORLresistancesources.RepTomatoGenetCoop，41：28–30.2LaterrotH，MorettiA.1995.ConfirmationoflinkageTm-2-ah-Frl.RepTomatoGenetCoop，45：29.MajidRF，FooladDR.2012.Marker-assistedselectionintomatobreeding.CriticalReviewsinPlantSciences，31：93–123.MenziesJG，KochC，SeywerdF.1990.AdditionstothehostrangeofFusariumoxysporumf.sp.radicis-lycopersici.PlantPathol，74：569–572.SatoR，ArakiT.1974.Onthetomatoroot-rotdiseaseoccurringundervinyl-houseconditionsinsouthernHokkaido.AnnualReportoftheSocietyofPlantProtectionofNorthJapan，25：5–13.ScottJW.2008.FreshmarkettomatobreedingintheUSA.ActaHort，789：21–25.ScottJW，JonesJP.2000.Fla.7775andFla.7781：tomatobreedinglinesresistanttoFusariumcrownandrootrot.HortScience，35：1183–1184.StaniaszekM，SzczechuraW，MarczewskiW.2014.IdentificationofanewmolecularmarkerC2-25linkedtotheFusariumoxysporumf.sp.radicis-lycopersiciresistanceFrlgeneintomato.CzechJournalofGeneticsandPlantBreeding，4：285–287.TanyolacB，AkkaleC.2010.ScreeningofresistancegenestofusariumrootrotandfusariumwiltdiseasesinF3familylinesoftomato（Lycopersiconesculentum）usingRAPDandCAPSmarkers.AfricanJournalofBiotechnology，9：2727–2730.TruongHTH，ChoiH，ChoMCh，LeeHE.2011.ConversionoftherandomamplifiedpolymorphicDNA（RAPD）markerUBC#116linkedtoFusariumcrownandrootrotresistancegene（Frl）intoaco-dominantsequencecharacterizedamplifiedregion（SCAR）markerformarker-assistedselectionoftomato.AfricanJournalofBiotechnology，10：1130–1136.VakalounakisDJ.1988.ThegeneticanalysisofresistancetoFusariumcrownandrootrotoftomato.PlantPathology，37：71–73.VakalounakisDJ，LaterrotH，MorettiA，LigoxigakisEK，SmardasK.1997.LinkagebetweenFrl（Fusariumoxysporumf.sp.radicis-lycopersici）andTm-2（tobaccomosaicvirusresistance-2）lociintomato（Lycopersiconesculentum）.AnnalsofAppliedBiology，130：319–323.YamamotoIH，KomadaK，KuniyasuM.1974.AnewraceofFusariumoxysporumf.sp.lycopersiciinducingrootrotoftomato.ProceedingsoftheKansaiPlantProtectionSociety，16：17–19.YangXiao-hui，CaroM，HuttonSF，ScottJW，GuoYan-mei，WangXiao-xuan，RashidMH，SzinayD，deJongH，VisserRGF，BaiYu-ling，DuYong-chen.2014.FinemappingofthetomatoyellowleafcurlvirusresistancegeneTy-2onchromosome11oftomato.MolecularBreeding，34(2)：749–760.